Физически методи за стерилизация.

МИНИСТЕРСТВО НА ЗДРАВЕОПАЗВАНЕТО НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ

ОБЩО ФАРМАКОПЕННО РАЗРЕШЕНИЕ

СтерилизацияOFS.1.1.0016.15

Вместо чл. GFXI, брой 2

Тази обща монография на фармакопеята установява методите и условията на стерилизация, използвани при приготвянето на стерилни лекарствени продукти.

Под стерилност се разбира липсата на жизнеспособни микроорганизми и техните спори.

Стерилизацията е валидиран процес, използван при приготвянето на стерилни лекарствени форми за освобождаване на продукта, оборудването, ексципиентите и опаковката от живи микроорганизми и техните спори.

При промяна на условията на стерилизация, включително при промяна на обема на зареждането на стерилизатора, е необходимо повторно валидиране.

Методите, описани по-долу, са приложими за инактивиране на бактерии, дрожди и плесени.

При възможност продуктите се стерилизират в крайната опаковка (финална стерилизация).

В случаите, когато не е възможна крайна стерилизация, се използва методът на мембранна филтрация или производство на лекарства при асептични условия без последваща стерилизация на крайния продукт. Допълнително е възможно да се извърши обработка на обекта (напр. стерилизация чрез гама лъчение) в крайната опаковка. Във всички случаи опаковката и затварянето трябва да гарантират стерилността на лекарството през целия срок на годност.

НИВО НА ОСИГУРЯВАНЕ НА СТЕРИЛНОСТ

За методите, описани по-долу, нивото на гарантиране на стерилност (SAL) се посочва, ако е необходимо.

Нивото на гаранция за стерилизация на стерилизационен процес е степента на сигурност, с която процесът гарантира стерилността на всички артикули в партида. За даден процес нивото на гаранция за стерилност се определя като вероятността да има нестерилен артикул в партидата. Например, SRL от 10 -6 означава, че има вероятност от най-много един жизнеспособен микроорганизъм в стерилизирана партида от 10 6 готов продукт. Нивото на гаранция за стерилност на процеса на стерилизация за конкретен продукт се установява по време на процеса на валидиране.

МЕТОДИ И УСЛОВИЯ ЗА СТЕРИЛИЗАЦИЯ

Стерилизацията може да се извърши по един от следните методи или комбинация от тях.

1. Термични методи:

• наситена пара под налягане (автоклавиране);
• горещ въздух (въздушна стерилизация).

1. Химични методи:

• газове;
• антисептични разтвори.

1. Стерилизация чрез филтриране (през филтри с необходимия размер на порите).
2. Метод на радиационна стерилизация.

Използването на модификация или комбинация от тези методи е разрешено, при условие че избраният процес на стерилизация е валидиран, за да се гарантира както ефективността на процеса, така и целостта на продукта, опаковката и капачките.

За всички методи на стерилизация, включително когато се използват стандартни условия, за да се потвърди, че са изпълнени необходимите условия за стерилизация за цялата продуктова партида, се извършва мониторинг през целия процес на стерилизация на критичните етапи от производството.

Термична стерилизация

Стерилизация с наситена пара под налягане (автоклавиране)

Стерилизацията с наситена пара се извършва при температура
120 - 122°C при налягане 120 kPa и при температура 130 - 132°C при налягане 200 kPa. Този метод се използва най-често за водни разтвори и други течни лекарствени форми в херметически затворени, предварително стерилизирани флакони, ампули или други видове опаковки. Стерилизацията се извършва в парни стерилизатори (автоклави). Стандартните условия са нагряване при температура 120 - 122 °C за 8-15 минути. Времето за стерилизация зависи от физикохимичните свойства и обема на продукта, както и от използваното оборудване (Таблица 1).

Таблица 1 - Времена на стерилизация за различни обеми разтвор

Мазнините и маслата се стерилизират при температура 120 - 122°С за 2 часа.

Изделия от стъкло, порцелан, метал, превързочни и спомагателни материали, при необходимост санитарно-технологични облекла, се стерилизират при температура 120 - 122°С - 45 минути, при
130 - 132 ° С - за 20 минути. За да стерилизирате гумени продукти, използвайте първия от тези режими.

Други комбинации от време и температура са разрешени, ако предварително е доказано, че избраният режим на стерилизация осигурява необходимото и възпроизводимо ниво на унищожаване на микроби. Използваните процедури трябва да осигуряват ниво на сигурност на стерилност не повече от 10 -6.

Автоклавът се зарежда по такъв начин, че да се осигури еднородност на температурата през целия товар. По време на процеса на автоклавиране трябва да се записват условията на процеса на стерилизация (температура, налягане и време). Температурата обикновено се измерва с помощта на термодвойки, поставени в контролни пакети, заедно с допълнителни термодвойки, поставени в най-студените места на стерилизационната камера, които са монтирани предварително. Условията на всеки цикъл на стерилизация се записват, например, под формата на диаграма температура-време или по друг подходящ начин.

За да се оцени ефективността на всеки цикъл на стерилизация, е възможно да се използват както химични (термо-времеви), така и биологични индикатори.

Стерилизация с горещ въздух (въздушна стерилизация)

За този метод на термична стерилизация стандартните условия са нагряване при температура най-малко 160 °C за най-малко
2 часа

За стерилизация на топлоустойчиви прахообразни вещества (натриев хлорид, цинков оксид, талк, бяла глина и др.) или минерални и растителни масла, мазнини, ланолин, вазелин, восък и др., Температурата и времето на стерилизация се задават в зависимост от върху масата на пробата (таблица 2 и 3).

Таблица 2 - Условия за стерилизация на топлоустойчиви прахове

Таблица 3 - Условия за стерилизация на минерални и растителни масла, мазнини, ланолин, вазелин, восък и др.

Изделия от стъкло, метал, порцелан, стерилизиращи филтриращи агрегати с филтри и приемници за филтрат се стерилизират при температура 180 °C за 60 минути или при температура 160 °C за 2,5 часа.

Въздушната стерилизация над 220°C обикновено се използва за стерилизация и депирогениране на стъклени опаковки. В този случай трябва да се докаже намаление с 3 порядъка на количеството на топлоустойчивите ендотоксини, вместо с помощта на биологични индикатори.

Могат да се използват комбинации от време и температура, ако предварително е доказано, че избраният режим на стерилизация осигурява необходимото и възпроизводимо ниво на унищожаване на микроби. Използваните процедури трябва да осигуряват ниво на сигурност на стерилност не повече от 10 -6.

Въздушната стерилизация се извършва в специален сухотоплинен шкаф с принудителна циркулация на стерилен въздух или на друго оборудване, специално предназначено за тази цел. Стерилизационният шкаф се зарежда по такъв начин, че да се осигури еднородност на температурата в целия товар. Температурата в стерилизационния шкаф обикновено се измерва с помощта на термодвойки, поставени в контролни пакети, заедно с допълнителни термодвойки, поставени в най-ниските температурни места на стерилизационния шкаф, които са монтирани предварително. Температурата и времето се записват по време на всеки цикъл на стерилизация. За да се оцени ефективността на всеки цикъл на стерилизация, е възможно да се използват както химични (термо-времеви), така и биологични индикатори.

Химическа стерилизация

Химическата стерилизация се извършва с газ или разтвори.

Газова стерилизация

Газова стерилизация се използва само ако не могат да се използват други методи. При този метод на стерилизация трябва да се осигури проникването на газ и влага в стерилизирания продукт, както и последващото обезгазяване и отстраняване на продуктите от разлагането му в стерилизирания продукт до ниво, което не предизвиква токсичен ефект при използване на лекарството .

Стерилизирането с газ се извършва в газови стерилизатори или микроанаеростати (преносими апарати), оборудвани със система за подаване на газ и дегазация след стерилизация. Като газ обикновено се използва етиленов оксид. Поради високата си опасност от пожар може да се смесва с всеки инертен газ.

Стерилизацията с газ се извършва при следните режими:

• - етиленов оксид: стерилизираща доза 1200 mg / dm 3, температура не по-ниска от
  18 °C, относителна влажност 80%, време на задържане - 16 часа (преносим апарат);
• - смес от етиленов оксид и метилбромид (1:2,5):

а) стерилизираща доза 2000 mg / dm 3, температура 55 ° C, относителна влажност 80%, време на експозиция 4 часа;

б) стерилизираща доза 2000 mg/dm 3 , температура не по-ниска от 18 °C, относителна влажност 80%, време на експозиция 16 часа.

Разрешено е използването на други валидирани режими на газова стерилизация, които гарантират стерилността и безопасността на обекта.

Етиленовият оксид може да бъде мутагенен и токсичен, особено когато се използват материали, съдържащи хлоридни йони. Поради токсичността на етиленовия оксид и метилбромида, използването на продукти, стерилизирани с тези газове, е разрешено само след тяхното дегазиране, т.е. излагане във вентилирано помещение на допустимите остатъчни количества, посочени в нормативната документация.

Условията за обезгазяване зависят от предназначението, начина на приложение, размерите на продукта, материала и опаковката на продукта и са посочени в нормативната и техническа документация за продукта.

Когато е възможно, по време на процеса на стерилизация се записват следните показатели: концентрация на газ, относителна влажност, температура и време за стерилизация. Измерванията се извършват в тези зони, където условията на стерилизация са постигнати най-лошо, което се установява по време на процеса на валидиране.

Стерилизираните продукти се опаковат в торби от полиетиленово фолио с дебелина от 0,06 до 0,20 mm, пергамент и др. Методът се препоръчва за продукти от каучук, полимерни материали, стъкло, метал.

Ефективността на процеса на газова стерилизация се проверява при всяко зареждане с помощта на биологични индикатори.

Преди освобождаването на всяка партида се проверява стерилността на определен брой проби.

Химическа стерилизация с разтвори

Химическата стерилизация се извършва с антисептични разтвори (водороден прекис и перкиселина). Ефективността на стерилизацията с антисептични разтвори зависи от концентрацията на активното вещество, времето за стерилизация и температурата на стерилизиращия разтвор.

При стерилизиране с 6% разтвор на водороден прекис температурата на стерилизиращия разтвор трябва да бъде най-малко 18 ° C, времето за стерилизация е 6 часа; при температура 50 ° C - 3 часа.

При стерилизация с 1% разтвор на деоксон-1 (с пероцетна киселина) температурата на стерилизиращия разтвор трябва да бъде най-малко 18 ° C, времето за стерилизация е 45 минути.

Химическата стерилизация с антисептични разтвори се извършва в затворени съдове от стъкло, пластмаса или съдове, покрити с непокътнат емайл, като продуктът е напълно потопен в разтвора за времето на стерилизация. След това продуктът се измива със стерилна вода при асептични условия.

Методът на стерилизация с антисептични разтвори се използва за продукти от полимерни материали, гума, стъкло, устойчиви на корозия метали.

Стерилизация чрез филтриране

Някои активни съставки и лекарствени продукти, които не могат да бъдат окончателно стерилизирани чрез никой от методите, описани по-горе, могат да бъдат стерилизирани с помощта на мембранни филтри. Такива продукти изискват специални предпазни мерки. Производственият процес и работната среда трябва да гарантират, че рискът от микробно замърсяване е сведен до минимум и трябва редовно да се наблюдават. Оборудването, опаковката, капачките и, когато е възможно, съставките трябва да бъдат подходящо стерилизирани. Препоръчително е да се извърши филтриране непосредствено преди пълнене на опаковката. Операциите след филтрирането се извършват при асептични условия.

Предварителната филтрация се извършва през мембранни филтри с размер на порите не повече от 0,45 μm. След това разтворите преминават през мембранни филтри с номинален размер на порите не повече от 0,22 микрона, способни да задържат най-малко 10 7 микроорганизми Pseudomonas диминутана квадратен сантиметър повърхност. Могат да се използват други видове филтри, които осигуряват същата ефективност на филтриране.

Пригодността на мембранните филтри се установява чрез микробиологично изследване с използване на подходящи микроорганизми, напр. Pseudomonas диминута(ATCC 19146, NCIMB 11091 или CIP 103020). Препоръчително е да използвате най-малко 10 7 CFU/cm 2 активна филтърна повърхност. Суспензия от микроорганизми трябва да се приготви в триптон-соев бульон, който след преминаване през филтъра се събира асептично и се инкубира при аеробни условия при температура не по-висока от 32 °C.

Нивото на филтрация се определя като стойността на логаритъма на намалението (LDR) на микробното замърсяване. Например, ако 107 микроорганизми се задържат по време на филтриране през мембранен филтър с размер на порите 0,22 µm, VLS е най-малко 7.

Трябва да се вземе предвид нивото на микробно замърсяване преди филтрирането, производителността на филтъра, размера на партидата на продукта, продължителността на филтрирането и да се избегне замърсяване на продукта с микроорганизми от филтъра. Периодът на използване на филтъра не трябва да надвишава времето, установено по време на валидирането на този филтър в комбинация с конкретен филтриран продукт. Не използвайте повторно мембранни филтри.

Целостта на готовия за употреба мембранен филтър се проверява преди и след филтриране чрез тестове, подходящи за типа филтър и етапа на проверка, например тест за насищане ("точка на мехурче") чрез метода на дифузионния поток или задържане на налягане .

Поради по-големия потенциален риск от филтрационна стерилизация в сравнение с други методи за стерилизация, се препоръчва предварително филтриране през мембранни филтри в случаите, когато ниско ниво на микробно замърсяване не може да бъде осигурено с други средства.

Получаване на лекарства в асептични условиябез последваща стерилизация на крайния продукт

Целта на получаването на лекарствени продукти при асептични условия без последваща стерилизация на крайния продукт е да се поддържа стерилността на лекарството, като се използват компоненти, всеки от които предварително е бил стерилизиран по един от методите, описани по-горе. Това се постига чрез провеждане на процеса в помещения с определен клас на чистота, както и използване на условия и оборудване, които осигуряват стерилност.

При асептични условия може да се извърши следното: процесът на пълнене на опаковката, затваряне, асептично смесване на съставките, последвано от асептично пълнене и затваряне. За да се запази стерилността на съставките и готовия продукт по време на производствения процес, трябва да се обърне специално внимание на:

• – състоянието на производствената среда;
• - персонал;
• – критични повърхности;
• – стерилизация на опаковки и процедури за затваряне и прехвърляне;
• - максимално допустимото време за съхранение на продукта до напълване на крайната опаковка.

Валидирането на процеса включва подходяща проверка на всичко по-горе, както и систематични контроли с помощта на симулационни тестове, използващи културни среди, които се инкубират и изследват за микробно замърсяване (тестове за пълнене на среди). Преди освобождаването на всяка партида филтърно стерилизиран и/или асептично произведен продукт трябва да се извърши тест за стерилност на подходящ брой проби.

Метод на радиационна стерилизация

Методът на радиационна стерилизация се осъществява чрез облъчване на продукта с йонизиращо лъчение. Този метод може да се използва за стерилизация на лечебни билкови суровини, билкови лекарства, билкови лекарства и др.

γ-лъчение, чийто източник може да бъде или радиоизотопен елемент (например кобалт-60), или електронен лъч, захранван от подходящ електронен ускорител.

За този метод на стерилизация дозата на абсорбция се задава от
10 до 50 kGy. Други дози могат да се използват, ако предварително е доказано, че избраният режим осигурява необходимото и възпроизводимо ниво на смъртност на микроорганизмите. Използваните процедури и предпазни мерки трябва да осигуряват ниво на сигурност на стерилност не повече от 10 -6.

Предимството на радиационната стерилизация е нейната ниска реактивност и лесно контролирана доза радиация, която може да бъде точно измерена. Радиационната стерилизация се извършва при минимална температура, но може да има ограничения при използването на определени видове стъклени и пластмасови опаковки.

По време на процеса на радиационна стерилизация радиацията, погълната от готовия продукт, трябва постоянно да се наблюдава с помощта на установени дозиметрични методи, независимо от дозата. Дозиметрите се калибрират спрямо стандартен източник в референтно радиационно съоръжение при получаване от доставчика и след това на интервали не по-големи от една година.

Ако е предоставена биологична оценка, тя се извършва с помощта на биологични индикатори.

БИОЛОГИЧНИ ПОКАЗАТЕЛИ ЗА СТЕРИЛИЗАЦИЯ

Биологичните индикатори са стандартизирани препарати от определени микроорганизми, използвани за оценка на ефективността на процеса на стерилизация.

Биологичен индикатор обикновено са бактериални спори, нанесени върху инертен носител като лента от филтърна хартия, стъклена плоча или пластмасова тръба. Инокулираният носител се изолира така, че да се предотврати неговото увреждане или замърсяване и в същото време да се осигури контакт на стерилизиращия агент с микроорганизми. Суспензиите от спори могат да бъдат в херметически затворени ампули.

Биологичните индикатори се изготвят по такъв начин, че да се гарантира тяхната безопасност при определени условия; трябва да имат срок на годност.

Същите щамове бактерии, които се използват при производството на биологични индикатори, могат да бъдат инокулирани директно в течния продукт, който ще се стерилизира, или в течен продукт, подобен на този, който ще бъде стерилизиран. В този случай трябва да се докаже, че течният продукт няма инхибиторен ефект върху спорите, особено върху тяхното покълване.

За биологичен индикатор се посочват следните характеристики: вида на бактериите, използвани като референтни микроорганизми; номер на щама в оригиналната колекция; брой жизнеспособни спори на носител; стойност д.

Стойност д– стойността на стерилизационния параметър (продължителност или погълната доза), който намалява броя на жизнеспособните микроорганизми до 10% от първоначалния им брой. Тази стойност има смисъл за добре дефинирани експериментални условия на стерилизация. Биологичният индикатор трябва да съдържа само посочените микроорганизми. Допуска се използването на биологични индикатори, съдържащи повече от един вид бактерии на един носител. Трябва да се предостави информация за хранителната среда и условията на инкубация.

Препоръчително е индикаторите да се поставят в зони, които са най-малко достъпни за стерилизиращия агент, определени предварително емпирично или въз основа на предварителни физически измервания. След излагане на стерилизиращия агент споровият носител се прехвърля в хранителна среда при асептични условия.

Разрешено е използването на биологични индикатори от промишлено производство в затворени ампули с хранителна среда, поставени директно в опаковката, защитаваща инокулирания носител.

Изборът на референтни микроорганизми за биологични индикатори се извършва, като се вземат предвид следните изисквания:

• - устойчивостта на тестовия щам към определен метод на стерилизация трябва да бъде по-висока от устойчивостта на всички патогенни микроорганизми и други микроорганизми, замърсяващи продукта;
• - изпитваният щам трябва да е непатогенен;
• – тестовият щам трябва да е лесен за култивиране.

Ако след инкубация се наблюдава растеж на референтни микроорганизми, това показва незадоволителен процес на стерилизация.

Характеристики на използването на биологични индикатори за стерилизация

Стерилизация с наситена пара под налягане

Биологичните индикатори за наблюдение на стерилизация с наситена пара под налягане се препоръчват за използване при валидирането на циклите на стерилизация. Препоръчително е да се използва бацил stearothermophilus(например ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157 или CIP 52.81). Броят на жизнеспособните спори трябва да надвишава 5 x 10 5 на носител. Стойност дпри температура 121 ° C трябва да бъде повече от 1,5 минути. Когато биологичен индикатор се третира с пара при температура (121 ± 1) °C под налягане от 120 kPa в продължение на 6 минути, трябва да се наблюдава запазването на жизнеспособни спори и третирането при същата температура в продължение на 15 минути трябва да доведе до пълната смърт на референтните микроорганизми.

Въздушна стерилизация

Препоръчва се за приготвяне на биологични индикатори бацил subtilis(например, вар. Нигер ATCC 9372, NCIMB 8058 или CIP 77.18). Броят на жизнеспособните спори трябва да надвишава 1 ∙ 10 5 на носител, стойността дпри температура 160 °C е 1 - 3 min. Горещ въздух при температури над 220°C често се използва за стерилизиране и депирогенизиране на стъклено оборудване. В този случай намаляването на количеството на топлоустойчивите бактериални ендотоксини с 3 порядъка може да послужи като заместител на биологичните индикатори.

Радиационна стерилизация

Биологичните индикатори могат да се използват за наблюдение на текущи операции като допълнителна оценка на ефективността на дадена доза радиация, особено в случай на стерилизация чрез ускорени електрони. Препоръчват се спорове бацил пумилус(например ATCC 27.142, NCTC 10327, NCIMB 10692 или CIP 77.25). Броят на жизнеспособните спори трябва да надвишава 1 ∙ 10 7 на носител. Стойност дтрябва да бъде повече от 1,9 kGy. Трябва да се провери дали след облъчване на биологичния индикатор с доза от 25 kGy (минимална погълната доза) не се наблюдава растеж на референтни микроорганизми.

Газова стерилизация

Използването на биологични индикатори е от съществено значение за всички процедури за газова стерилизация, както за валидиране на цикъла, така и за рутинни операции. Препоръчва се използването на спори бацил subtilis(например, вар. Нигер ATCC 9372, NCIMB 8058 или CIP 77.18), когато използвате етилен оксид. Броят на жизнеспособните спори трябва да надвишава 5 x 10 5 на носител. Параметрите за стабилност са както следва: де повече от 2,5 минути за цикличен тест при 600 mg/l етиленов оксид, 54°C и 60% относителна влажност. Трябва да се провери дали след 60-минутен цикъл на стерилизация с посочените параметри не се наблюдава растеж на референтни микроорганизми, докато след 15-минутен цикъл на стерилизация при по-ниска температура (600 mg/l, 30 °C, 60% влажност) ), жизнеспособността на спорите се поддържа.

Биологичният индикатор трябва да може да открива недостатъчна влага в стерилизатора и продукта: когато е изложен на етиленов оксид в концентрация 600 mg/l при температура 54 °C за 60 минути без влага, жизнеспособността на спорите трябва да се запази .

МИНИСТЕРСТВО НА ОБРАЗОВАНИЕТО И НАУКАТА

БАЛТИЙСКИ ФЕДЕРАЛЕН УНИВЕРСИТЕТ

НА ИМЕТО НА ИМАНУЕЛ КАНТ

ФАКУЛТЕТ ПО БИОЕКОЛОГИЯ

МЕТОДИ ЗА СТЕРИЛИЗАЦИЯ

Студенти 2-ра година

редовно обучение

Панкина А. Н.,

Волошина А. Ю.

Калининград

Въведение……………………………………………………………………………………..3

Методи за стерилизация……………………………………………………………….……4

1 Методи за физическа стерилизация………………………………………….….5

1.1 Запалване………………………………………………………………..5

1.2 Стерилизация със суха топлина……………………………………….……..5

1.3 Стерилизация с влажна топлина……………………………………………..5

1.4 Варене…………………………………………………………………..5

1.5 Стерилизация с пара…………………………………………....6

1.6 Автоклавиране………………………………………………………...6

1.7 Частична стерилизация………………………………………….………..7

1.8 Пастьоризация…………………………………………………….………...7

1.9 Тиндализация………………………………………………………………..7

2 Методи за химическа стерилизация………………………………….…………….8

2.1 Течен метод………………………………………….…………….8

2.2 Газов метод……………………………………………….…………….8

2.3 Плазма…………………………………………………….………….9

3 Стерилизация чрез йонизиращо лъчение………………………………………9

3.1 Метод на облъчване………………………………………….…………..10

3.2 Ултравиолетово лъчение…………………………………………...10

Въведение

Стерилизация - пълното освобождаване на всеки обект от всички видове микроорганизми, включително бактерии и техните спори, гъбички, вириони, както и от прион протеин, намиращ се върху повърхности, оборудване, храни и лекарства. Извършва се чрез термични, химични, радиационни, филтрационни методи.

Стъпки на стерилизация:

дезинфекция;

предстерилизационно почистване (PSO);

стерилизация.

Методи за стерилизация

1 Физически методи за стерилизация

Физичните методи на стерилизация включват въздействието на висока температура върху стерилизираните обекти (термична стерилизация), както и въздействието на ултравиолетово лъчение, високочестотни токове, ултразвукови вибрации, радиоактивно лъчение, инфрачервени лъчи и др.

Във фармацевтичната практика за стерилизиране на съдове и лекарства се използват само методи, базирани на излагане на високи температури. Ултравиолетовото облъчване се използва главно за дезинфекция на въздуха в аптечните помещения, контейнерите и рецептите, влизащи в аптеката.

Използването на висока температура за стерилизация се основава на необратима коагулация на протоплазмата, нейното пирогенно разрушаване и увреждане на ензимните системи на микробната клетка. Температурата и продължителността на нагряване, необходими за постигане на стерилност, могат да варират в зависимост от вида на микрофлората и други условия.

Повечето патогени умират при около 60°C, но техните спори могат да издържат на много по-високи температури. Течаща пара и вряща вода убиват микроорганизмите много по-бързо, но много спори оцеляват няколко часа при тези условия (особено във вискозна среда). Чистата водна пара е по-силна, отколкото когато е смесена с въздух.

Парата под налягане (при температури над 100°C) убива микроорганизмите по-бързо. Сухият горещ въздух убива бактериите и техните спори при по-висока температура от парата. Изборът на метод зависи от свойствата на обекта, който ще се стерилизира. При избора на метод за стерилизация се стремят към пълното елиминиране на живата микрофлора и спори, като в същото време се запазва непроменено лечебното вещество.

Калциниране

Запалването е един от най-надеждните видове стерилизация. Извършва се в муфелни или тигелни пещи чрез нагряване на обекта до 500-800 ° или чрез калциниране на гол огън. Използва се за стерилизиране на платинени игли за спринцовки, порцеланови филтри и други порцеланови изделия. Не се препоръчва да стерилизирате стоманени предмети по този начин, тъй като те ръждясват и губят втвърдяването си.

Стерилизация със суха топлина

Предметът за стерилизация се загрява в пещ при температура 180°С за 20-40 минути или при 200°С за 10-20 минути. Сухата топлина стерилизира стъклени и порцеланови съдове, мазнини, вазелин, глицерин, топлоустойчиви прахове (каолин, стрептоцид, талк, калциев сулфат, цинков оксид и др.).

Невъзможно е да се стерилизират водни разтвори в колби в сушилни шкафове, тъй като водата при високи температури се превръща в пара и колбата може да се скъса.

Стерилизация чрез влажна топлина

При използването на този метод на стерилизация се комбинират ефектите на висока температура и влажност. Ако сухата топлина причинява главно пирогенетично унищожаване на микроорганизми, тогава влажната топлина причинява коагулация на протеини, което изисква участието на вода.

На практика стерилизацията с влажна топлина се извършва при температура 50-150 ° и се извършва по следните начини.

кипене

С този метод се стерилизират гумени предмети, хирургически инструменти, стъклария. Не се препоръчва използването на кипене за стерилизация на инжекционни разтвори, тъй като е значително по-ниска от стерилизацията с пара по отношение на ефективността.

Парна стерилизация

Течността се нарича наситена водна пара (без примес на въздух), имаща налягане 760 mm Hg. Изкуство. и температура 100°. Стерилизацията с течаща пара се извършва в парен стерилизатор или автоклав при 100°C за 15-60 минути в зависимост от обема на разтвора. Това е един от често срещаните методи за стерилизиране на инжекционни разтвори в аптеките.

Автоклавиране

Парна стерилизация под налягане (автоклавиране). Извършва се в автоклави с различни конструкции. Автоклавът е херметически затворен съд, състоящ се от дебелостенна стерилизационна камера и корпус. Автоклавът има предпазен клапан, който позволява на парата да излиза при свръхналягане и манометър. Всеки автоклав трябва да има инструкция за експлоатация и поддръжка, както и паспорт за надзор на котела.

Предметът за стерилизация се поставя в парната камера. Водната камера се подлага на нагряване. Първо, автоклавът се нагрява при отворен кран, докато парата тече в силен непрекъснат поток и измества въздуха в автоклава, което значително намалява топлопроводимостта на водната пара (при съдържание на въздух от 5% във водна пара тя намалява с 50%).

По време на нагряването на автоклава след затваряне на вентила е необходимо да се следи налягането, успоредно с увеличаването на което се повишава температурата на парата.

Автоклавирането е най-надеждният метод за стерилизация. Обикновено стерилизацията в автоклав се извършва при 119-121°C за 5-30 минути, в зависимост от обема на разтвора. Това гарантира достатъчно пълна стерилизация, независимо от вида на микроорганизма. Така се стерилизират съдове, хартиени и стъклени филтри, инструменти, водни разтвори на устойчиви на висока температура лекарствени вещества, превръзки.

Фракционна стерилизация

При фракционна стерилизация обект (обикновено воден разтвор) се нагрява с течна пара при 100°C в продължение на 30 минути, след което разтворът се държи при стайна температура в продължение на 24 часа, след което отново се стерилизира при същите условия (30 минути при 100°C). Описаният цикъл се повтаря 3-5 пъти. При първото нагряване загиват вегетативните форми на микроорганизмите, при следващото нагряване - новопоявилите се вегетативни форми. Поради продължителността този метод рядко се използва в аптеките.

Пастьоризация

Еднократно нагряване на обекта при температура 60° за 1 час или при температура 70-80° за 30 минути. Позволява ви да унищожите вегетативните форми на микробите (с изключение на термофилните), но не и спорите.

Тиндализация

Тиндализация (фракционна пастьоризация). При тиндализация предметът се нагрява при температура 60-65° в продължение на 1 час дневно в продължение на 5 дни или при 70-80° в продължение на 3 дни. Това е надежден и щадящ начин за стерилизиране на термолабилни лекарствени вещества. Но поради продължителността си не е много подходящ за аптеките и почти не се използва в последните.

Химични методи за стерилизация

течен метод

С помощта на течна стерилизация се обработват продукти от термочувствителни материали. Обработката се извършва със специални химически разтвори с помощта на камери.

Представляват контейнер от неръждаема стомана с капак и перфориран рафт. Инструментите се обработват под действието на специален разтвор, който при необходимост може да се нагрее.

Такива камери могат да се използват и за съхранение и транспортиране на инструменти.

газов метод

Газовата стерилизация се извършва по методи с етиленов оксид и формалдехид. За него се използват специални стационарни инсталации.

Методът с етиленов оксид е много подходящ за обработка на пластмасови и полимерни продукти, оптика. Извършва се с помощта на специална газова камера. Въздухът се евакуира от камерата, а поставените в нея предмети се обработват с газ.

Формалдехидният метод е по-подходящ за дезинфекция, тъй като формалдехидът има ниски проникващи характеристики. Освен това температурата в камерата за обработка трябва да достигне 80°C.

Основното предимство на методите за газова стерилизация е нискотемпературният режим на процеса, което дава възможност за обработка на инструменти, които не позволяват излагане на висока температура и влага.

Газовите стерилизатори са оборудвани със система за оползотворяване на газа, което ги прави безвредни както за хората, така и за околната среда. Оборудването е оборудвано с вградени аератори. Стерилизиращият агент е в сменяеми запечатани патрони, които се отварят само когато устройството е напълно запечатано.

плазма

Методът на плазмена стерилизация е най-модерният и практичен метод, който ви позволява да обработвате всякакви медицински продукти и устройства, които са чувствителни към влага и температура. Този метод се основава на създаването на биоцидна среда с помощта на нискотемпературна плазма и воден разтвор на водороден пероксид.

При използването на плазмения метод се унищожават всички видове микроорганизми под всякаква форма, не се генерират токсични отпадъци.

Обработката в плазмен стерилизатор е сух процес, протича при температури до 60°C и продължава от 35 минути.

Този метод се използва широко при обработката на оптични системи, продукти от полимерни материали, електрически инструменти и кабели, ендоскопи и свързани инструменти, сензори, импланти и други продукти.

Плазменият метод е един от най-актуалните и надеждни методи днес.

Стерилизация чрез йонизиращо лъчение

радиационен метод

Радиационният метод или радиационната стерилизация с γ-лъчи се използва в специални инсталации за еднократна промишлена стерилизация - полимерни спринцовки, системи за кръвопреливане, петриеви панички, пипети и други чупливи и термолабилни продукти.

Ултравиолетова радиация

В продължение на няколко години ултравиолетовото (UV) лъчение (дължина на вълната 253,7 nm) се използва във фармацевтичната технология за стерилизация. Източници на UV радиация - живачни кварцови лампи. Тяхното мощно бактериостатично действие се основава на съвпадението на емисионния спектър на лампата и спектъра на поглъщане на ДНК на микроорганизмите, което може да бъде причина за смъртта им при продължително излагане на лъчението на кварцовата лампа. При недостатъчно мощно UV действие в прокариотната клетка се активират процесите на светло и тъмно възстановяване и клетката може да се възстанови. Методът се използва за стерилизация на приточна и смукателна вентилация, оборудване в биксове, както и за стерилизация на дестилирана вода.

Варенето е метод на стерилизация, който гарантира стерилизация при условие, че няма спори в стерилизирания материал. Използват се за обработка на спринцовки на инструменти, стъклени и метални съдове, гумени тръби и др.

Стерилизацията с кипене обикновено се извършва в стерилизатор - правоъгълна метална кутия с плътно затварящ се капак. Материалът за стерилизация се поставя върху мрежата в стерилизатора и се пълни с вода. За да увеличите точката на кипене и да премахнете твърдостта на водата, добавете 1-2% натриев бикарбонат (по-добре е да използвате дестилирана вода). Стерилизаторът се затваря с капак и се затопля.За начало на стерилизацията се счита моментът на кипене на водата, времето за кипене е 15-30 минути. В края на стерилизацията мрежата с инструменти се отстранява чрез страничните дръжки със специални куки, а инструментите в нея се вземат със стерилни пинсети или щипки, които се изваряват заедно с останалите инструменти.

Парната стерилизация се извършва по два начина: 1) пара под налягане; 2) течаща пара.

Стерилизация под налягане на парапроизведени в автоклав. Този метод на стерилизация се основава на въздействието на наситени водни пари върху стерилизираните материали при налягане над атмосферното. В резултат на такава стерилизация, както вегетативните, така и споровите форми на микроорганизмите умират по време на едно третиране.

Автоклав (фиг. 12) - масивен котел, покрит отвън с метален кожух, херметически затворен с капак, който е здраво завинтен към котела с шарнирни болтове. Друг, по-малък диаметър, който се нарича стерилизационна камера, се вкарва във външния котел. Предметите за стерилизация се поставят в тази камера. Между двата котела има свободно пространство, наречено водно-парна камера. Водата се излива в тази камера през фуния, фиксирана отвън до определено ниво, отбелязано на специална водомерна тръба. Когато водата се вари в парна камера, се получава пара. Стерилизационната камера е оборудвана с изпускателен кран с предпазен клапан за излизане на парата, когато налягането се повиши над необходимото ниво. За определяне на налягането, създадено в стерилизационната камера, се използва манометър.

Ориз. 12. Схема на автоклава. M - манометър; PC - предпазен клапан; B - фуния за вода; K 2 - кран за изпускане на вода; К 3 - кран за изпускане на пара

Нормалното атмосферно налягане (760 mm Hg) се приема за нула. Съществува определена връзка между показанията на манометъра и температурата (Таблица 2).

Таблица 2. Режим на работа на автоклава

Вече се предлагат автоклави с автоматичен контрол на режима. В допълнение към обикновения манометър, те са оборудвани с електроконтактен манометър, който предотвратява повишаването на налягането над зададената стойност и по този начин осигурява постоянството на желаната температура в автоклава.

Различни хранителни среди (с изключение на тези, съдържащи естествени протеини), течности (изотоничен разтвор на натриев хлорид, вода и др.) се стерилизират с пара под налягане; уреди, особено тези с гумени части.

Температурата и продължителността на автоклавиране на хранителните среди се определят от техния състав, посочен в рецептата за приготвяне на хранителната среда. Например, прости среди (месен пептонен агар, месен пептонен бульон) се стерилизират за 20 минути при 120 ° C (1 atm). При тази температура обаче е невъзможно да се стерилизира среда, съдържаща естествени протеини, въглехидрати и други вещества, лесно променящи се чрез нагряване. Средите с въглехидрати се стерилизират фракционно при 100°C или в автоклав при 112°C (0,5 atm) за 10-15 минути. Различни течности, устройства с гумени маркучи, тапи, бактериални свещи и филтри се стерилизират за 20 минути при 120 ° C (1 atm).

внимание! В автоклавите се неутрализира и заразеният материал. Чаши и епруветки, съдържащи култури от микроорганизми, се поставят в специални метални кофи или резервоари с отвори в капака за проникване на пара и се стерилизират в автоклав при 126 ° C (1,5 atm) в продължение на 1 час. Инструментите се стерилизират по същия начин след работа с бактерии, които предизвикват противоречия.

До работа с автоклава се допускат само специално обучени лица, които трябва стриктно и точно да спазват правилата, посочени в приложената към уреда инструкция.

Техника на автоклавиране. 1. Преди работа проверете изправността на всички части и прилепването на крановете.

2. През фуния, закрепена от външната страна на бойлера, се налива вода (дестилирана или преварена) до горната маркировка на водомерното стъкло, за да не се образува котлен камък. Кранът под фунията е затворен.

3. Материалът за стерилизация се поставя върху специална мрежа в стерилизационната камера. Предметите не трябва да се зареждат твърде плътно, тъй като парата трябва да преминава свободно между тях, в противен случай те няма да се нагреят до правилната температура и може да останат нестерилни.

4. Гуменото уплътнение на капака се натрива с тебешир за по-добро уплътнение.

5. Капакът се затваря и завинтва към тялото на автоклава, като болтовете се завъртат по двойки на кръст.

6. Отворете напълно изпускателния кран, свързващ стерилизационната камера с външния въздух, и започнете да загрявате автоклава. Автоклавът обикновено се нагрява с газ или електричество.

При нагряване на автоклава водата завира, получената пара се издига между стените на котлите и през специални отвори в стената на вътрешния бойлер (виж фиг. 12), навлиза в стерилизационната камера и излиза през отворения изходен кран. Първо, парата излиза заедно с въздуха, който е бил в автоклава. От съществено значение е целият въздух да бъде изхвърлен от автоклава, в противен случай показанията на манометъра няма да съответстват на температурата в автоклава.

Появата на непрекъсната силна струя пара показва пълното отстраняване на въздуха от автоклава; след това изходният кран се затваря и налягането вътре в автоклава започва постепенно да се повишава.

7. За начало на стерилизация се счита моментът, в който показанията на манометъра достигнат определената стойност. Нагряването се регулира така, че налягането в автоклава да не се променя за определено време.

8. След изтичане на времето за стерилизация, нагряването на автоклава се спира, парата се изпуска през изходния кран. Когато стрелката на манометъра падне до нула, отворете капака. За да избегнете изгаряния от парата, останала в автоклава, отворете капака към вас.

Може да се провери нивото на температурата в автоклава, т.е. изправността на манометъра. За това се използват различни вещества, които имат определена точка на топене: антипирин (113 ° C), резорцинол и сяра (119 ° C), бензоена киселина (120 ° C). Едно от тези вещества се смесва с незначително количество багрило (магента или метиленово синьо) и се излива в стъклена тръба, която се затваря и се поставя във вертикално положение между материала, който ще се стерилизира. Ако температурата е достатъчна, веществото ще се стопи и ще се превърне в цвета на съответното багрило.

За да се провери ефективността на стерилизацията, в автоклава се поставя епруветка с известна култура от спори. След автоклавиране епруветката се прехвърля в термостат за 24-48 часа, като се отбелязва липсата или наличието на растеж. Липсата на растеж показва правилната работа на устройството.

Парна стерилизацияпроизведени в апарата на Кох. Този метод се използва в случаите, когато обектът за стерилизация се променя при температура над 100 ° C. Течната пара стерилизира хранителни среди, съдържащи урея, въглехидрати, мляко, картофи, желатин и др.

Апаратът на Кох (котел) е метален цилиндър, обвит отвън (за намаляване на топлообмена) с филц или азбест. Цилиндърът е затворен с коничен капак с отвор за излизане на парата. Вътре в цилиндъра има поставка, до нивото на която се налива вода. Върху стойката се поставя кофа с отвор, в която се поставя материалът за стерилизация. Апаратът на Кох се нагрява с газ или електричество. Времето за стерилизация се отчита от момента на енергично изпускане на пара по краищата на капака и от изхода на парата. Стерилизирайте 30-60 минути. В края на стерилизацията нагряването се спира. Кофата с материала се изважда от апарата и се оставя на стайна температура до следващия ден. Загряването се извършва в продължение на 3 дни подред при температура 100 ° C за 30-60 минути. Този метод се нарича фракционна стерилизация. При първото нагряване вегетативните форми на микробите загиват, а споровите остават. През деня спорите имат време да покълнат и да се превърнат във вегетативни форми, които умират на втория ден от стерилизацията. Тъй като е възможно някои от спорите да не са имали време да покълнат, материалът се съхранява още 24 часа и след това се извършва трета стерилизация. Стерилизацията с течаща пара в апарата на Кох не изисква специален контрол, тъй като стерилността на приготвената хранителна среда служи като индикатор за правилната работа на устройството. Парна стерилизация може да се извърши и в автоклав с отвинтен капак и отворен изходен кран.

тестови въпроси

1. Какви хранителни среди могат да бъдат стерилизирани с пара?

2. Какво е стерилизатор и как работи?

3. Защо трябва да се използва дестилирана вода за кипяща стерилизация?

4. Опишете устройството и режима на работа на автоклава.

5. Какво се стерилизира в автоклав?

6. Какво контролира правилната стерилизация при автоклавиране?

7. Какво е парна стерилизация?

8. Опишете устройството на апарата на Кох.

9. Каква е целта на фракционната стерилизация?

Упражнение

Попълнете формата.

Фракционната стерилизация може да се извърши и в машина за навиване на Koch.

Коагулаторът на Кох се използва за коагулиране на хранителни среди от суроватка и яйца, като едновременно с уплътняването на средата се извършва стерилизация.

Навивач на Кохпредставлява плоска метална кутия с двойни стени, покрита отвън с топлоизолационен материал. Водата се излива в пространството между стените през специален отвор, разположен в горната част на външната стена. Отворът се затваря със запушалка, в която се поставя термометър. Затворете устройството с два капака: стъкло и метал. През стъкления капак можете да наблюдавате процеса на съсирване. Епруветките със среда се поставят на дъното на машината за навиване в наклонено положение.

Отоплението на бобината се извършва с газ или електричество. Средите се стерилизират еднократно при температура 90°С за 1 час или частично - 3 дни подред при 80°С за 1 час.

Тиндализация* - фракционна стерилизация при ниски температури - използва се за вещества, които лесно се разрушават и денатурират при температура от 60 ° C (например протеинови течности). Материалът, който се стерилизира, се нагрява на водна баня или в специални устройства с термостати при температура 56-58 ° C за един час в продължение на 5 дни подред.

* (Методът на стерилизация е кръстен на Тиндал, който го предлага.)

Пастьоризация- стерилизация при 65-70 ° C за 1 час, предложена от Пастьор за унищожаване на неспорови форми на микроби. Пастьоризирайте мляко, вино, бира, плодови сокове и други продукти. Млякото се пастьоризира, за да се отърве от млечнокисели и патогенни бактерии (Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Shigella, Salmonella, Staphylococcus и др.). Пастьоризацията на бира, плодови сокове, вино убива микроорганизмите, които причиняват различни видове ферментация. Пастьоризираните храни се съхраняват най-добре в хладилник.

тестови въпроси

1. Какво е предназначението и устройството на машината за навиване на Koch?

2. Какви са методите за стерилизация в машината за навиване?

3. Какво е тиндализация?

4. Какво е пастьоризация?

ОЦЕНКА НА ЕФЕКТИВНОСТТА НА ДЕЙСТВИЕТО НА АНТИСЕПТИЦИ И ДЕЗИНФЕКТАНТИ. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ЧУВСТВИТЕЛНОСТТА НА БАКТЕРИИТЕ КЪМ АНТИМИКРОБНИ ЛЕКАРСТВА

Въведение.Унищожаването на патогенните за човека микроби е един от най-важните проблеми при профилактиката и лечението на различни заболявания. За борба с микробите се използват методи на асептика, антисептика, дезинфекция и антимикробна терапия. Всеки метод има свои специфични цели и условия на приложение.

Тема 7.1. МЕТОДИ ЗА ОЦЕНКА НА АНТИМИКРОБНИЯ ЕФЕКТ НА ХИМИЧНИТЕ И ФИЗИЧНИТЕ ФАКТОРИ

Въведение.асептика -система от мерки, които предотвратяват въвеждането (навлизането) на микроорганизми от околната среда в тъканите или кухините на човешкото тяло по време на терапевтични и диагностични манипулации, както и в материала за изследване, в хранителни среди и култури от микроорганизми при лабораторни изследвания . Асептиката осигурява спазването на специални санитарни и хигиенни правила и методи на работа, както и специална обработка на инструменти, материали, ръце на медицински работници, помещения и др. с цел частично (дезинфекция) или пълно (стерилизация) унищожаване на микроби.

Антисептици- комплекс от терапевтични и превантивни мерки, насочени към унищожаване на микроорганизми, които могат да причинят инфекциозен процес в увредени участъци от кожата и лигавиците, чрез третиране с микробицидни вещества - антисептици.

Стерилизация- пълно унищожаване на микроорганизми, включително вегетативни форми и спори. Различават се 3 основни групи методи за стерилизация: физични, механични и химични. Изборът на метод, използван за решаване на практически проблем, зависи от обекта, който ще се стерилизира.

Дезинфекция- дезинфекция на обекти от околната среда. За разлика от стерилизацията, дезинфекцията води до смъртта на повечето, но не всички, форми на микроби и по този начин осигурява само намаляване на микробното замърсяване (замърсяване), а не пълно обеззаразяване на обекта. Следователно обектите, които са били дезинфекцирани, не са абсолютно безопасни.

▲ Планирайте

▲ програма

1. Асептика, антисептика и дезинфекция. Антисептици и дезинфектанти.

2. Антимикробно действие на физични и химични фактори.

3. Методи за стерилизация; апарати, използвани за стерилизация.

4. Методи за контрол на ефективността на стерилизацията, действието на антисептиците и дезинфектантите.

Демонстрация

1. Апаратура, използвана при стерилизация: автоклав, пещ, апарат за филтриране и UV облъчване.

НО Упражнениестуденти

1. Вземете предвид резултатите от експериментите, проведени с бактериални тестови обекти, за да контролирате ефективността на стерилизацията, извършена чрез кипене и автоклавиране. За да направя извод.

2. Определете антибактериалния ефект на UV лъчите върху стафилококи и Escherichia coli, като използвате готови посеви.

3. Вземете предвид резултатите от експериментите, поставени за определяне на антимикробния ефект на антисептичните и дезинфекциращите вещества. За да направя извод.

Насоки

Методи за стерилизация

I. Физични методи.Излагане на високи температури. Високата температура има микробициден ефект поради способността да предизвиква денатурация на най-важните биополимери, предимно протеини.

Стерилизация чрез суха топлина в сушилно-стерилизиращ шкаф (пещи на Пастьор)се основава на бактерицидния ефект на въздуха, загрят до 165-170 ° C в продължение на 45 минути. При по-висока температура се получава овъгляване на памучни тампони, хартия, в която са опаковани съдовете, а при по-ниска е необходим дълъг период на стерилизация. Сухата топлина стерилизира стъклени изделия (Петриеви блюда, епруветки, пипети и др.).

Автоклавиране- Стерилизация с прегрята пара (при повишено налягане) в парен стерилизатор (автоклав). Един от най-ефективните методи за стерилизация, който намира широко приложение не само в микробиологичната, но и в клиничната практика. Работата с автоклав изисква точно изпълнение на специални инструкции и спазване на правилата за безопасност. Максималната температура на парата се измерва със специален термометър, който се поставя в автоклава заедно с материала за стерилизация. В някои случаи се използват химикали с определена точка на топене: бензонафтол (PO °C), бензоена киселина (120 °C). Много хранителни среди, превръзки, бельо се стерилизират при налягане 1 atm за 15-20 минути, хранителни среди с въглехидрати при 0,5 atm за 15 минути, а дезинфекцията на заразения материал се извършва при 1,5-2 atm за 20 -25 минути (Таблица 7.1.1).

Таблица 7.1.1. Връзка между налягане, температура и продължителност на стерилизация в парен стерилизатор (автоклав)

0 100 30-60 (дробни) 0,5 111 20-30

1 121 15-20 1,5 127 15-20

Парна стерилизацияизвършва се в автоклав с отвинтен капак и отворен изходен кран. Този метод на стерилизация се основава на антибактериалния ефект на парата върху вегетативните клетки. Използва се в случаите, когато материалът за стерилизация не издържа на високи температури, като например хранителни среди с витамини, въглехидрати. За пълно обеззаразяване се използва принципът на фракционна стерилизация, т.е. материалът се стерилизира при 100 "C (или 80-90 ° C) за 20-30 минути в продължение на 3 дни подред. В този случай вегетативните клетки умират, а спорите остават и покълват за 1 ден. Последващо двойно нагряване осигурява достатъчно надеждна стерилност на материала.

Тиндализация -това е фракционна стерилизация на материали при 56-58 "C за 1 час 5-6 дни подред. Използва се за стерилизация на вещества, които лесно се разрушават при високи температури (кръвен серум, витамини и др.).

Запалване в пламъкаспиртна печка или газова горелка

Смяната е ограничена, например за стерилизация на бактериологични бримки, дисекционни игли, пинсети.

Излагане на йонизиращо лъчение. Микробицидният ефект на йонизиращото лъчение се основава на способността им да причиняват увреждане на ДНК молекулата. За стерилизация на медицински инструменти за еднократна употреба и бактериологично оборудване, чувствително към термични ефекти (пластмасови съдове за култивиране на микроби и клетъчни култури, пластмасови спринцовки, системи за кръвопреливане и др.), Обикновено се използва стерилизация чрез γ-лъчение.

I. Механични методи.Те се основават на филтриране през специални мембранни филтри с малък размер на порите, способни механично да задържат микроорганизми. Хартиените и полимерни филтри намират широко приложение в лабораторната практика. Има филтри с пори с различни, строго калибрирани размери, което ви позволява да гарантирате пречистването на материала не само от бактерии, но и от вируси и, ако е необходимо, от някои макромолекули. Филтрацията се използва за стерилизиране на течни материали, които не могат да издържат на топлина (кръвен серум, антимикробни разтвори, компоненти на хранителни среди за бактерии и клетъчни култури), за получаване на бактериални токсини и други отпадъчни продукти от бактерии. Филтрирането е водещ метод за стерилизация на въздуха, когато е необходимо. За да направите това, въздухът преминава през филтри, импрегнирани с микробициди. Такива системи за стерилизация се използват например в настолни кутии за работа с патогени на особено опасни инфекции, както и в операционни зали, родилни отделения и др.

III. Химични методи.Те се основават на третиране на обект с химикали, които имат микробициден ефект и са способни, при определени режими на експозиция, да осигурят пълното унищожаване на микрофлората. Химическата стерилизация обикновено се използва за обработка на различни устройства и инструменти за многократна употреба, които са чувствителни към високи температури (фиброоптични устройства, медицински импланти и др.). Стерилизиращите агенти включват етиленов оксид, водороден прекис, глутаралдехид, пероксиоцетна киселина, хлорен диоксид.

Независимо от метода, във всички случаи е необходимо редовно проследяване на ефективността на процедурата по стерилизация. За тази цел се използват биологични индикатори - известни микроорганизми, които са най-устойчиви на този метод на обработка (например спори Bacillus stearothermophilusза контрол на ефективността на автоклавирането, Bacillus subtilis- за контрол на стерилизация със суха топлина). Има и физико-химични индикатори – вещества, които претърпяват видим

моите промени (промяна на цвят, състояние на агрегиране и т.н.) само ако се спазва правилният режим на обработка.

Методи за дезинфекция

За дезинфекция се използват физични и химични методи.

I. Физични методи.Излагане на високи температури
обиколка.

кипене.Спринцовки, малки хирургически инструменти, предметни стъкла и покривни стъкла и някои други предмети се поставят в стерилизатори, в които се налива вода. За премахване на твърдостта и повишаване на точката на кипене към водата се добавя 1-2% разтвор на натриев бикарбонат. Варенето се извършва най-малко 30 минути. При варене някои вируси (например вирус на хепатит B) и бактериални спори остават жизнеспособни.

Пастьоризациявъз основа на антибактериалния ефект на температурата върху вегетативните клетки, но не и върху бактериалните спори. Материалът се нагрява при температура 50-65 "С за 5-10 минути, последвано от бързо охлаждане. Обикновено се пастьоризират напитки и хранителни продукти (вино, бира, сокове, мляко и др.).

Излагане на йонизиращо лъчение. ултравиолетова радиация(UV) с дължина на вълната 260-300 микрона има доста изразен микробициден ефект, но някои видове микроби и спори са устойчиви на UV. Поради това UV облъчването не е в състояние да осигури пълно унищожаване на микрофлората - стерилизация на обекта. UV обработката обикновено се използва за частична дезинфекция (дезинфекция) на големи обекти: повърхности на предмети, помещения, въздух в медицински заведения, микробиологични лаборатории и др.

Гама радиацияима изразен микробициден ефект върху повечето микроорганизми, включително вегетативни форми на бактерии и спори на повечето видове, гъбички, вируси. Използва се за стерилизиране на пластмасови съдове и медицински инструменти за еднократна употреба. Трябва да се има предвид, че лечението с гама лъчение не гарантира унищожаването на инфекциозни агенти като приони.

II. Химични методи.Това е обработка на дезинфекциран обект
tami - микробицидни химикали. някои
някои от тези съединения могат да имат токсични ефекти
върху човешкото тяло, така че се използват изключително
За обработка на външни обекти. Като дезинфектант
обикновено се използва водороден прекис, съдържащ хлор
единство (0,1-10% разтвор на белина, 0,5-5% разтвор
хлорамин, 0,1-10 % разтвор на две трети основна сол на хипо-

Калциев хлорат - DTSGK), формалдехид, феноли (3-5% разтвор на фенол, лизол или карболова киселина), йодофори. Изборът на дезинфектант и неговата концентрация зависят от материала, който ще се дезинфекцира. Дезинфекцията може да бъде достатъчна за обеззаразяване само на тези медицински инструменти, които не проникват през естествените бариери на тялото (ларингоскопи, цистоскопи, вентилатори). Някои вещества (борна киселина, мертиолат, глицерин) се използват като консерванти за приготвяне на терапевтични и диагностични серуми, ваксини и други препарати.

Антисептични методи

Като антисептици се използват само съединения с ниска токсичност за тялото, които имат антимикробен ефект. Най-често се използват 70% етилов алкохол, 5% разтвор на йод, 0,1% разтвор на KMnO 4, 0,5-1% алкохолни разтвори на метиленово синьо или брилянтно зелено, 0,75-4,0% разтвор на хлорхексидин, 1-3% разтвор на хексахлорофен и някои други. съединения. Антимикробни агенти също се добавят към материали, използвани в производството на превръзки, лейкопластири, зъбни протези, материали за пломбиране и други подобни. за да им придаде бактерицидни свойства.

Методи за контрол на ефективността на стерилизацията, действието на антисептиците и дезинфектантите. Изследване на антибактериалното действие на високите температури. Поставете копринени нишки, навлажнени със смес от спорообразуващи (3 епруветки) и неспорообразуващи (3 епруветки) култури в епруветки с хранителен бульон. Автоклавирайте или варете една епруветка с всяка култура; Не излагайте контролните тръби на никакъв удар. След обработката дръжте всички култури в термостат при 37 ° C за 24 часа.Отбележете резултата от експеримента и направете заключение.

Контрол на стерилността на превръзките и хирургическите инструменти. Тестовите проби (или тампони от повърхността на големи инструменти) се посяват върху три среди: захарен бульон, тиогликолова среда и течна среда на Сабуро. Културите се инкубират в термостат за 14 дни. При липса на растеж във всички култури, материалът се счита за стерилен.

Изследване на антибактериалното действие на UV лъчите. Суспензия от стафилококи или E.coliв изотоничен разтвор на натриев хлорид в обем от 1 ml, поставете на разстояние 10-20 cm от центъра на лампата. Инокулирайте облъчените и необлъчените (контролни) бактериални суспензии в хранителен бульон и инкубирайте

при 37 ° C за 16-24 часа, след което оценете резултатите: липсата на мътност на средата е свързана със смъртта на облъчената бактериална култура, мътността се отбелязва в контролата, което показва наличието на растеж.

Определяне на антимикробното действие на антисептици и дезинфектанти. 1. Подгответе два вида тестови обекти: а) копринени нишки, напоени с култура E.coli;б) копринени нишки, навлажнени със спорообразуваща култура (с високо съдържание на спори). Нишките се поставят в разтвори на фенол (5%), лизол (5%), белина (10%) за 5 и 60 минути, след това се измиват от изпитваните вещества, засяват се в хранителен бульон и се поставят в термостат до следващия ден . Контролните проби не трябва да се излагат на химикали. Отбележете резултата от експеримента и направете заключение.

2. Навлажнете филтърни хартиени дискове с разтвори на изпитваните вещества и поставете върху повърхността на хранителен агар в петриево блюдо, засено (с трева) с тестова култура от стафилококи или Escherichia coli. Инкубирайте съда за 24 часа при 37°C. За антибактериалното действие на изследваните вещества се съди по диаметъра на зоните на инхибиране на бактериалния растеж, образувани около дисковете.

Тема 7.2. МЕТОДИ ЗА ОЦЕНКА НА ЕФЕКТИВНОСТТА НА ДЕЙСТВИЕТО НА АНТИМИКРОБНИ ЛЕКАРСТВА

Въведение. Антимикробните средства (естествени и синтетични антибиотици) се използват за лечение на заболявания, причинени от микроорганизми. За ефективна терапия е необходимо да се избере лекарство, което има най-голяма активност срещу този инфекциозен агент и има най-малко увреждане на нормалната човешка микрофлора. Широкото разпространение на бактериални щамове с различна степен на резистентност към много лекарства (мултирезистентност) прави качествената (метод на диска) и количествената (метод на серийно разреждане) оценка на бактериалната чувствителност към терапевтични лекарства особено актуална.

▲ Програма

1. Спектри на действие на основните групи антимикробни лекарства.

2. Оценка на ефекта на антимикробните лекарства върху бактериите по метода на диска.

3. Определяне на минималната инхибиторна концентрация (MIC) на антимикробни лекарства по метода на серийните разреждания.

НО.Демонстрация

1. Антимикробни средства от различни групи.

2. Стандартни хартиени дискове, импрегнирани с антимикробни агенти за определяне на чувствителността на бактериите към тях.

3. Таблици и схеми на антимикробните спектри на най-важните групи антибиотици и механизмите на тяхното антибактериално действие.

Задание на учениците

1. Направете експеримент за определяне на чувствителността на стафилококите към различни антибиотици, като използвате метода на диска.

2. Въз основа на резултатите от експеримента определете минималната инхибираща концентрация на пеницилин за различни бактериални култури чрез метода на серийни разреждания.

Насоки

Количествено определяне на чувствителността на бактериите към антимикробни лекарства чрез метода на серийни разреждания.Този метод се използва за определяне на минималната инхибиторна концентрация (MPC) - най-ниската концентрация на антибиотик, която напълно потиска растежа на изследваните бактерии. Приготвя се изходен разтвор на антибиотик, съдържащ лекарството в определена концентрация (μg / ml или U / ml) във физиологичен или буферен разтвор или в специален разтворител. Основният разтвор се използва за приготвяне на серийни (2-кратни) разреждания на антибиотика в хранителна среда - бульон (в обем 1 ml) или агар. От изследваната бактериална култура се приготвя суспензия със стандартна плътност и се инокулира в 0,1 ml върху среди с различни концентрации на антибиотика, както и върху среда без препарата (културен контрол). Културите се инкубират при 37°C за 20-24 часа или повече (за бавно растящи бактерии), след което резултатите от експеримента се отбелязват за помътняване на хранителния бульон или появата на видим растеж на бактерии върху агара, сравняват се с управлението.взето като IPC.

като MIC се приема най-високата концентрация на лекарството, която предотвратява развитието на CPP или натрупването на патогенни антигени в клетките.

Интерпретация на резултатите, т.е. оценка на клиничната чувствителност, извършена въз основа на критериите, дадени в табл. 7.2.1. Чувствителните щамове включват бактериални щамове, чийто растеж се инхибира при концентрации на лекарството, открити в кръвния серум на пациента, когато се използват средни терапевтични дози антибиотици. Умерено резистентните щамове включват щамове, чието потискане на растежа изисква концентрации, които се създават в кръвния серум, когато се прилагат максималните терапевтични дози от лекарството. Микроорганизмите са устойчиви, чийто растеж не се потиска от лекарството в концентрации, създадени в тялото при използване на максимално допустимите дози.

Таблица 7.2.1. Интерпретациярезултатите от определянето на чувствителността на бактериите към антибиотици чрез метода на серийни разреждания

Антибиотик	MIC (mcg/ml)
	Усещам-	междинен	стабилен-
	тяло	точен	див лук
	(С)	(Д	(R)
Пеницилини
Бензилпеницилин:
за стафилококи	£0,12	-	>0,25
за други бактерии	<1,5		>1,5
Оксацилин
за Стафилококус ауреус	<2	-	>4
за други видове стафилококи	<0,25	-	>0,5
Метицилин	<2	-	>4
Ампицилин:
за стафилококи	<0,25	-	>0,5
за E.coliи други ентеробактерии	<8		>32
Карбеницилин:
за E.coliи други ентеробактерии	<16		>64
за Pseudomonas aeruginosa	<128		>512
Пиперацилин
за E.coliи други ентеробактерии	<16		>64
за Pseudomonas aeruginosa	>64	-	>182
Азлоцилин	<64	-	>128
Цефалоспорини
Цефазолин	<8		>32
Цефалотин	<8		>32
Цефаклор	<8		>32
Цефалексин	<8		>32
Цефуроксим	<8		>32

Продължение

междинен (Д

Цефамандол		<8		>32
Цефотаксим		<8	16-32	>64
Цефтриаксон		<8	16-32	>64
Цефоперазон		<16		>64
Цефтазидим		<8		>32
цефепим	Нова бета версия	<8 -лактамы		>32
Имипенем		<4		>16
Меропенем		<4		>16
	Хинолони
Налидиксова киселина	SI6	-	>32
Ципрофлоксацин		<1		>4
Офлоксацин		<2		>8
Норфлоксацин		<4 юзиды		>16
	аминогли
Канамицин		<16		>64
Гентамицин		<4		>16
Тобрамицин		<4		>16
Амикацин		<16		>64
Нетилмицин		<8		>32
Тетрациклини, макролиди, линкозамиди
Тетрациклин		<2	4-8	>16
Доксициклин		<4		>16
Еритромицин		50,5	1-4	>8
Азитромицин		<2		>8
Кларитромицин		<2		>8
Алеандомицин		<2		>8
Линкомицин		<2		>8
Клиндамицин		<0,25	0,5	>1
	Антибиотици от други групи
Хлорамфеникол (лъв	омицетин)	<8		>32
Фузидова киселина		<2	4-8	>16
Рифампицин		<2		>8
Полимиксин		<50 ЕД/мл		>50 U/ml
Ванкомицин		<4	8-16	S32
Фурадонин		<32		>128

Микротест системи за определяне на чувствителността към антимикробни лекарства.Системите за микротест са предназначени за бързо определяне на клиничната чувствителност към антибиотици на бактерии от определени видове или сродни групи. Тестваните лекарства в стандартни концентрации се намират в ямките на готови пластмасови плаки. Определя се чувствителността на изследваната култура към две концентрации на всеки антибиотик: средна терапевтична и максимална. Материалът от изолирана колония се въвежда в 5 ml стандартна хранителна среда, съдържаща индикатор, с помощта на измервателна бактериологична примка (обем 1 μl) и се приготвя суспензия. Приготвената бактериална суспензия се излива в ямките на таблетката с 0,1 ml и се инкубира при оптимални за този вид бактерии условия на температура и газов състав на средата. Растежът на бактериите се оценява по промяната в цвета на индикатора, което може значително да намали времето за изследване. Ако бактериите останат жизнеспособни в присъствието на антибиотик, освобождаването на метаболитни продукти води до промяна в цвета на индикатора. Липсата на промяна на цвета показва пълното потискане на жизнената активност на микроба. Резултатите се определят след 4 часа инкубация с помощта на спектрофотометър.

Определяне на клиничната чувствителност на бактериите към антимикробни лекарства по метода на диска (дифузионен тест). Методът се основава на потискане на бактериалния растеж върху плътна хранителна среда под действието на антибиотик, съдържащ се в хартиен диск. В резултат на дифузията на лекарството в агара се образува концентрационен градиент на антибиотика около диска. Размерът на зоната на инхибиране на растежа зависи от чувствителността на бактерията и свойствата на лекарството (по-специално от скоростта на дифузия в агара). За определяне на чувствителността в клиничната практика се използват готови стандартни дискове със строго определено съдържание на антибиотици. Съдържанието на лекарството се определя въз основа на терапевтичните концентрации на всеки антибиотик и средните стойности на MIC за патогенни бактерии. На всеки диск е посочено наименованието на лекарството и неговото количество. За определяне на чувствителността се приготвя суспензия, съдържаща стандартен брой жизнеспособни клетки от изследваната бактериална култура и се посява с трева в петриеви панички (диаметър 100 mm) върху среда на Muller-Hinton или AGV (специална среда, която не пречи на дифузията на антимикробни вещества и нямат негативен ефект върху тях). Дискове се нанасят върху засятата повърхност с помощта на апликатор на разстояние 2,5 cm от центъра на съда в кръг (фиг. 7.2.1). На чашата се поставят не повече от 5 диска. Културите се инкубират в продължение на 18-20 часа при 35 ° С. Ако процедурата е извършена правилно, на фона на равномерна бактериална морава около дисковете,

Зони на инхибиране на растежа, имащи кръгла форма. Отчитането на резултатите се извършва чрез измерване на диаметъра на зоната на инхибиране на растежа. За площта, която ще се измерва, вземете зоната, в която напълно липсва растеж на бактерии. Интерпретацията на получените резултати (заключението за чувствителността) се извършва въз основа на критериите, дадени в табл. 7.2.2.

Таблица 7.2.2. Тълкуване на резултатите от определяне на чувствителността на бактериите към антибиотици по метода на диска (на AGV среда)

Пеницилини

Бензилпеницилин:
при изследване на стафилококи	£20	21-	-28	>29
при изследване на други бактерии	£10	11-	-16	£17
Ампицилин:
при изследване на стафилококи	<20	21-	-28	£29
при грам-отрицателен тест
бактерии и ентерококи	<9	10-	-13	>14
Карбеницилин (25 mcg)	£14	15-	-18	>19
Карбеницилин (100 mcg) при
тест P. Aeruginosa	£11	12-	-14	£15
Метицилин	£13	14-	-18	>19
Оксацилин (10 mcg)	$15	16-	-19	£20
Азлоцилин (за P.aeruginosa)	£13	14-	-16	£16
Пиперацилин (за P.aeruginosa)	<17			>18
Азтреонам	<15	16-	-21	£22

Цефалоспорини

Продължение

Антибиотик	Диаметър	закърнели зони
		(mm)
	Усещам-	междинен	стабилен-
	тяло	точен	див лук
	(С)	(Д	(R)
Нови бета лактами
Имипенем*<13	14-15	>16
Меропенем*<13	14-15	>16
Хинолони
Ципрофлоксацин<15	16-20	>21
Офлоксацин<12	13-16	>17
Налидиксинова киселина*<12	13-17	>18
Аминогликозиди
Стрептомицин<16	17-19	>20
Канамицин<14	15-18	>19
Гентамицин £15	-	>16
сизомицин<15	-	>16
Тобрамицин<14	-	>15
Амикацин<14	15-16	>17
Нетилмицин<12	13-14	>15
Тетрациклини, макролиди, линкозамиди
Тетрациклин<16	17-20	>22
Доксициклин<15	16-19	>20
Еритромицин<17	18-21	>22
Азитромицин<13	14-17	>18
Рокситромицин*<14	15-18	>19
Кларитромицин* £13	14-17	>18
Линкомицин<19	20-23	£24
Клиндамицин £14	15-20	>21
Олеандомицин £16	17-20	>21
Антибиотици от други групи
Хлорамфеникол<15	16-18	>19
Фузидова киселина<16	17-20	>21
Рифампицин<12	13-15	>16
Полимиксин<11	12-14	>15
Ванкомицин:
за стафилококи<11	-	>12
за ентерококи<14	15-16	>17
Ристомицин<9	10-11	>12
Фурадонин £15	16-18	>19
Фурагин £15	16-18	>19

*Предварителни данни.

Използването на дисковия метод има редица ограничения. Методът е подходящ само за определяне на чувствителността на бързорастящи бактерии, които образуват хомогенна морава в рамките на 24 часа върху стандартна плътна хранителна среда с доста прост състав (Muller-Hinton или AGW), която не съдържа вещества, които могат да намалят активността на антибиотици или предотвратяване на тяхното разпространение. В противен случай получената информация ще бъде неточна.

По този начин дисковият метод не може да се използва за определяне на чувствителността към антибиотици на всички бавнорастящи и най-претенциозни бактерии, които включват много човешки патогени. (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp.и много други). При определяне на чувствителността на някои придирчиви бактерии, за които са разработени стандартни тестове (Haemophilus spp., Neisseria spp.,някои видове стрептококи), специални хранителни среди и допълнителни критерии трябва да се използват при тълкуване на резултатите.

Дисковият метод също не дава надеждни резултати при определяне на чувствителността на бактериите към препарати, които дифундират слабо в агар, например полипептидни антибиотици (полимиксин, ристомицин).

Количествено определяне на чувствителността на бактериите към антимикробни лекарства с помощта на Е-тест.Е-тестът е вариант на дифузионния метод, който ви позволява да определите MIC на антибиотик. Вместо дискове се използват стандартни полимерни ленти, изготвени по специална технология (AB BIODISK) и съдържащи имобилизирани антимикробни агенти, нанесени под формата на непрекъснат концентрационен градиент. От другата страна на лентата

Таблица 7.2.3. Определяне на MIC на антимикробни средства по метода на серийни разреждания

Е-тестът има скала от IPC стойности. Когато лентата се постави върху повърхността на агара, процесът на контролирана дифузия гарантира, че в хранителната среда около лентата се създава стабилен концентрационен градиент на лекарството, съответстващ на скалата. Процедурата за определяне на чувствителността с помощта на E-тест се извършва подобно на тестването по метода на диска. След инкубацията на семето около лентата се образува елипсовидна зона на инхибиране на растежа. IPC стойността съответства на пресечната точка на елиптичната зона с Е-тест лентата. За интерпретиране на резултатите (оценка на клиничната чувствителност) се използват стандартни критерии (Таблица 7.2.3).

ЕКОЛОГИЯ НА МИКРООРГАНИЗМИТЕ

Въведение.Екологията на микроорганизмите е дял от общата микробиология и изучава взаимоотношенията на микро- и макроорганизмите, живеещи заедно в определени биотопи. В естествените местообитания (почва, вода, въздух, живи организми) микробите са част от различни биоценози. Екологията на микробите, причиняващи човешки заболявания, се определя от способността им да оцеляват във външната среда, да променят гостоприемниците, да се задържат в тялото на гостоприемника на фона на имунната система и също така се свързват с методите на тяхното разпространение, предаване и редица други фактори. Оценката на редица условия на околната среда е една от основните задачи на санитарната микробиология.

Санитарно-бактериологичните изследвания са в основата на практическата работа на санитарните лекари и епидемиолози при санитарно-хигиенната оценка на обекти на околната среда, хранителни продукти, напитки и др. и играят водеща роля в превенцията на инфекциозните заболявания. Важен обект на изследване в медицинската микробиология е нормалната микрофлора на човешкото тяло, която включва микроби, които живеят върху кожата, лигавиците на различни органи (устна кухина, фаринкс, назофаринкс, горни дихателни пътища, черва, особено дебелото черво, и т.н.). Някои от тях са постоянен (задължен)обитатели на човешкото тяло, други - временно (незадължително или преходно).Нормалната микрофлора е жизненоважна система на тялото, която осигурява защита срещу много патогенни микроби, съзряване и стимулиране на имунната система, производството на редица витамини и ензими, участващи в храносмилането и др.

Качественият и количественият състав на човешката микрофлора се променя през целия живот и зависи от пола, възрастта, диетата и др. В допълнение, колебанията в състава на човешката микрофлора могат да се дължат на появата на заболявания и употребата на лекарства, предимно антибиотици и имуномодулатори . Оценката на качествения и количествения състав на микрофлората на човешкото тяло по определени показатели позволява да се идентифицират нейните нарушения (дисбактериоза) и свързаните с нея последствия.

Тема 8.1. МИКРОФЛОРА НА ВОДАТА, ВЪЗДУХА И ПОЧВАТА. МЕТОДИ ЗА САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧНО ИЗСЛЕДВАНЕ НА ВОДА, ВЪЗДУХ И ПОЧВА

g Програма

1. Микрофлора на вода, въздух и почва.

2. Санитарнопоказателни микроорганизми и тяхното значение.

3. Методи за определяне на if-индекс, if-титър и микробно число на водата.

4. Методи за определяне на микробното число на въздуха.

5. Методи за определяне на перфрингенс титър, коли титър и микробно число в почвата.

НОДемонстрация

1. Санитарно и бактериологично изследване на водата по метода на мембранните филтри.

2. Санитарно-бактериологично изследване на въздуха. Апаратът на Кротов. Растеж на микроорганизми върху MPA в петриево блюдо. Растеж на хемолитични стрептококи върху кръвен агар.

3. Санитарно и бактериологично изследване на почвата. Растеж Протей вулгарис(по Шукевич).

аЗадание на учениците

1. Да се ​​оцени санитарното и бактериологичното състояние на водата въз основа на резултатите от определяне на микробния брой, коли-индекс и коли-титър.

2. Да се ​​оцени санитарното и бактериологичното състояние на въздуха въз основа на резултатите от определянето на микробния брой.

3. Да се ​​оцени санитарното и бактериологичното състояние на почвата въз основа на резултатите от определяне на микробния брой, коли-титър, perfringens-титър и титър на термофилни бактерии.

4. Инокулирайте измиване от кожата на ръцете върху глюкозо-пептонна среда.

▲ Насоки

Микробиологични методи за изследване на околната среда

За оценка на санитарно-хигиенното състояние на различни обекти на околната среда, вода, храна и др., Извършват се санитарни и бактериологични изследвания, чиято цел е да се определи епидемичната опасност. Директното откриване на патогенни микроби обаче е свързано с редица трудности, главно поради ниската концентрация на тези микроби, които по правило не могат да се размножават във въздуха, водата и почвата. Затова в санитарната и микробиологичната практика се използват индиректни методи, базирани на определяне на общото микробно замърсяване на един или друг обект и на откриване на т.нар. санитарно-показателни бактерии(Таблица 8.1.1).

Таблица 8.1.1. Санитарно-показателни бактерии на околната среда и храните

Предмет	Характер на замърсяването	Санитарно показателни бактерии
вода	фекален	Бактерии от групата на Escherichia coli Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis
Почвата	Един и същ	Същите бактерии и клостридии (Clostridium perfringens, CI. sporogenesи т.н.)
	Индустриален-ежедневен-	термофилни бактерии, Протей
	вие (разлагащ се боклук)	вулгарис
храна	фекален
продукти		ключалки S. faecalis, P. vulgaris
	Капково вливане през устата	Стафилококус ауреус
Предмети	фекален	Бактерии от групата на чревния тракт
ежедневието		ключалки, P. vulgaris, E. faecalis
	Капково вливане през устата	S. aureus
Въздух	Един и същ	S. aureus, S. pyogenes
вода,	Индустриален	Производствени щамове на микро-
почвата,		халати
въздух

Санитарно-показателни микроби, показващи фекално замърсяванесреда, са бактериите от групата на Escherichia coli (CGB). Те принадлежат към различни родове на семейството Enterobacteriaceae.Диференциално-диагностичните признаци на БГКП са представени в табл. 8.1.2. Откриването на E. coli във всякакви екологични или хранителни продукти се счита за най-надеждният индикатор за прясно фекално замърсяване. Наличие на бактерии Citrobacterи Enterobacterпоказва относително старо фекално замърсяване. Наличието на Clostridium perfringens, C. sporogens и други клостридии в почвата показва нейното фекално замърсяване, както прясно, така и старо, тъй като тези бактерии образуват спори, което им позволява да се задържат в околната среда (по-специално в почвата) за дълго време. Откриване в обекти на околната среда Ентерококус фекалиссъщо показва тяхното фекално замърсяване. Групата на термофилните бактерии включва несвързани бактерии, представители на различни семейства, които могат да се размножават при температура от 60 ° C и по-висока. (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilusи т.н.). Те не са постоянни обитатели на човешките черва и не служат като критерии за фекално замърсяване на околната среда. Рязкото увеличаване на броя на тези бактерии може да показва замърсяване на почвата с разлагащи се отпадъци, тъй като те се размножават в самозагряващ се тор и компост.

Таблица 8.1.2. Диференциално диагностични признаци на БГКП

ЕшерихияСмесете + - +

коликиселини

CitrobacterСъщото + - p + +

freundii

EnterobacterБутан - - + - + +

аерогенидиол

Символи: (+) - положителна реакция, (-) - отрицателна реакция, p - различни реакции.

Бактерии, принадлежащи към род Протей (P.vulgaris)и др.) семейства Enterobacteriaceae,широко разпространени в природата. Тези гнилостни бактерии се намират в големи количества върху разлагащите се останки от животни и растения. Откриването на тези бактерии във всяка храна показва гнилостно разпадане.

Хемолитични стрептококи (S.pyogenes),като транзитни жители на назофаринкса и фаринкса, те се екскретират с капчици слуз чрез въздушни капчици. Условията за оцеляване на хемолитичните стрептококи в околната среда практически не се различават от условията, характерни за повечето други патогени на въздушно-капкови инфекции. Откриването на хемолитични стрептококи във въздуха на закрито показва възможното му замърсяване с микроби, съдържащи се във фаринкса, назофаринкса, горните дихателни пътища на човек и които са причинители на въздушно-капкови инфекции. Стафилококус ауреусе незадължителен обитател на назофаринкса, фаринкса, както и на човешката кожа. Наличието му във въздуха на помещенията или върху предмети, разположени там, е индикатор замърсяване по въздуха.Едновременното откриване на Staphylococcus aureus и хемолитични стрептококи показва висока степен на замърсяване на въздуха.

Санитарно-бактериологично изследване на водата

Определяне на микробното число на водата. Водата от чешмата се инокулира в обем 1 ml, вода от открити водоеми - в обеми 1,0; 0,1 и 0,01 мл. Всички проби се поставят в стерилни петриеви панички, след което се заливат с 10-12 ml разтопен и охладен до 45-50°C хранителен агар, който внимателно се изпарява.

Старателно се смесва с вода. Културите се инкубират при 37 °C за 1-2 дни. Вода от открити резервоари се инокулира паралелно върху две серии чаши, едната от които се инкубира при 37 °C за 1 ден, а другата за 2 дни при 20 °C. След това се преброява и изчислява броят на колониите, израснали на повърхността и в дълбочината на средата микробно число на водата- броя на микроорганизмите в 1 мл.

Определяне на if-титър и if-индекс на вода. Коли-титървода - минималното количество вода (ml), в което се откриват CGB. Коли-индекс- количеството на БГКП в 1 литър вода. Тези показатели се определят чрез метода на титруване (ферментация) или метода на мембранните филтри.

Метод на титруване. Различни обеми вода се инокулират в глюкозо-пептонна среда (1% пептонна вода, 0,5% разтвор на глюкоза, 0,5% разтвор на натриев хлорид, индикатор Andrede и поплавък), а за инокулиране на големи количества (100 и 10 ml) използва се концентрирана среда, съдържаща 10 пъти повече от тези вещества.

Водата на откритите повърхностни водоеми се изследва в обеми от 100; десет; 1,0 и 0,1 мл. За изследване на чешмяна вода се правят посеви в три обема от 100 ml, три обема от 10 ml и три обема от 1 ml. Инокулациите се инкубират в продължение на 1 ден при 37°C. За ферментацията се съди по наличието на газови мехурчета в поплавъка. Ферментирали или мътни проби се култивират върху среда Endo. От порасналите колонии се правят натривки, оцветяват се по Грам и се прави оксидазен тест за разграничаване на бактериите от родовете Escherichia, Citrobacterи Enterobacterот грам-отрицателни бактерии от семейство Pseudomonadaceae и други оксидаза-положителни бактерии, живеещи във вода. За тази цел 2-3 изолирани колонии се отстраняват от повърхността на средата със стъклена пръчка, нанесена с удар върху филтърна хартия, навлажнена с ди-метил-р-фенилендиамин. При отрицателен оксидазен тест цветът на хартията не се променя, при положителен - става син в рамките на 1 минута. Грам-отрицателните пръчици, които не образуват оксидаза, отново се изследват във ферментационен тест - въвеждат се в полутечен хранителен агар с 0,5 % разтвор на глюкоза и се инкубира при 37 °C за 1 ден. Ако резултатът е положителен, ако титърът и ако индексът се определят според статистическата таблица. 8.1.3.

Метод на мембранен филтър. Мембранен филтър № 3 се поставя във фуния на Seitz, монтирана в колба на Бунзен, която е свързана с вакуумна помпа. Мембранните филтри се стерилизират предварително чрез изваряване в дестилирана вода. Филтрира се вода от водопроводната мрежа и вода от артезиански кладенци в обем 333 мл. Чистата вода от отворен резервоар се филтрира в обем от 100, 10, 1,0 и 0,1 ml, по-замърсената вода се разрежда със стерилна вода преди филтриране.

Таблица 8.1.3. Определяне на индекса на бактерии от групата Escherichia coli при изследване на вода

Коли-титър

от 3 обема по 100 мл

вода. След това филтрите се поставят върху повърхността на средата Endo в петриеви панички и след инкубиране при 37°C за 1 ден се преброява броят на израсналите колонии, типични за CGB. Приготвят се натривки от 2-3 червени колонии, оцветяват се по метода на Грам и се определя оксидазната активност. За да направите това, филтърът с бактериални колонии, отглеждани върху него, се прехвърля с пинсети, без да се обръща, върху кръг от филтърна хартия, навлажнен с диметил-р-фенилендиамин. При наличие на оксидаза индикаторът оцветява колонията в синьо. 2-3 колонии, които не са променили първоначалния си цвят, се инокулират в полутечна среда с 0,5% разтвор на глюкоза. Културите се инкубират в продължение на 24 часа при 37°С. При наличие на образуване на газ се преброява броя на червените колонии върху филтъра и се определя коли индекса. Нормативните показатели за питейната вода са дадени в табл. 8.1.4.

Таблица 8.1.4. Стандарти за питейна вода (GOST 2874-82)

стандартен

Индекс

Броят на микробите в 1 ml вода не повече от 100

Броят на бактериите от групата на Escherichia coli в 1 литър вода 3

(if-index), не повече

За определяне на титъра Ентерококус фекалиспригответе 10-кратни разреждания на вода. Цялата вода и нейните разреждания в обем от 1 ml се инокулират в една от течните елективни среди (KF, поли-

Myxinovaya и др.), инкубирани при 37 ° С в продължение на 2 дни, след 24 и 48 часа, се правят посевки върху плътни елективно-диференциални среди: KF агар, TTX агар (среда с трифенилтетразолиев хлорид), полимиксинтелурит агар. Идентифицират се стрептококи. според вида на колониите, клетъчната морфология и оцветяването по метода на Грам. Върху среда с ТТХ стрептококите образуват тъмночервени колонии, върху агар с телурит - черни.

Съставът на медиите. KF среда: 2% хранителен агар, 1% екстракт от дрожди, 2% лактоза, 0,4% натриев азид, 0,06% натриев карбонат, бромкрезолов червен индикатор.

Полимиксинова среда: 2% хранителен агар, 1% екстракт от дрожди, 1% глюкоза, полимиксин М 200 единици/ml, индикатор бромтимолово синьо.

Полимиксинтелурит агар: 2% хранителен агар, 1% екстракт от дрожди, 1% глюкоза, кристално виолетово 1:800 000, полимиксин М 200 U/ml, 0,01% калиев телурит.

Трифенилтетразолиев хлорид агар (TTC): 2% хранителен агар, 1% екстракт от дрожди, 1% глюкоза, кристално виолетово 1:800 000, 0,01% TTC.

При дефиниране на индекс E.faecalisизползвайте статистическите таблици, използвани за установяване на коли индекса. Освен това за тази цел се използва методът на мембранния филтър. За откриване на патогенни бактерии водата преминава през мембранни филтри, които след това се поставят в течна елективна среда или върху повърхността на плътна среда за диференциална диагностика.

Санитарно-бактериологично изследване на въздуха

Определяне на микробното число на въздуха.Количествените микробиологични методи за изследване на въздуха се основават на принципите на утаяване (утаяване), аспирация или филтрация.

седиментационен метод. Две петриеви панички с хранителен агар се оставят отворени за 60 минути, след което посевите се инкубират в термостат при 37 ° C. Резултатите се оценяват по общия брой на колониите, отгледани на двете блюда: ако има по-малко от 250 колонии, въздухът се счита за чист; 250-500 колонии показват средно замърсяване, като броят на колониите над 500 е замърсен.

метод на аспирация. Това е по-точен количествен метод за определяне на микробното число на въздуха. Въздушното засяване се извършва с помощта на устройства. Апаратът на Кротов (фиг. 8.1.1) е проектиран по такъв начин, че въздухът се засмуква с определена скорост през тесен процеп на плоча от плексиглас, който затваря петриевото блюдо с хранителен агар.

Фиг.8.1.1. Апарат Кротов за бактериологични изследвания

В същото време аерозолните частици със съдържащите се върху тях микроорганизми са равномерно фиксирани върху цялата повърхност на средата поради постоянното въртене на чашата под входния процеп. След инкубиране на сеитбата в термостат, микробният брой се изчислява по формулата:

а х 1000 x~y

където a е броят на колониите, израснали върху блюдото; V е обемът на въздуха, преминал през устройството, dm 3; 1000 - стандартен въздушен обем, dm 3.

При определяне на микробния брой на въздуха се използва хранителен агар за изолиране на хемолитични стрептококи - кръвен агар с добавяне на генциан виолет, последвано от контролна микроскопия и селективна субкултура на подозрителни колонии върху кръвен агар.

Съставът на медиите.Кръвен агар от тинтява виолет: 2% хранителен агар, 5-10% дефибринирана кръв от кон, заек или овен, тинтява виолет (1:50 000).

Жълтъчно-солев агар (YSA): 2% хранителен агар, 10% натриев хлорид, 20 % (по обем) жълтъчна суспензия (1 яйчен жълтък на 200 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид).

Други устройства също могат да се използват за изследване на въздуха (Дяков, Речменски, Киктенко, PAB-1 - вземане на проби -

Ник аерозолен бактериологичен, POV-1 - устройство за вземане на проби от въздух), с помощта на което определен обем въздух преминава през течности или филтри, след което се правят измерени култури върху хранителни среди. Използването на PAB-1 и POV-1 дава възможност за изследване на големи обеми въздух и откриване на патогенни бактерии и вируси.

При изследване на въздуха на болници (хирургични, акушерско-гинекологични и др.) Директно се изолират патогенни и условно патогенни бактерии - патогени на нозокомиални инфекции (стафилококи, Pseudomonas aeruginosa и др.). В случай на нозокомиални инфекции на стафилококова етиология се провеждат изследвания, насочени към идентифициране на източниците и пътищата на разпространение на инфекциите: чрез фаготипиране се определя идентичността на стафилококите, изолирани от обекти на околната среда, както и от пациенти и придружители. Стандартни показатели за микробно число и съдържание Staphylococcus aureus, Глава 2. Държавна социална помощ, предоставена под формата на предоставяне на граждани на набор от социални услуги 10 страница

Глава 2. Държавна социална помощ, предоставена под формата на предоставяне на граждани на набор от социални услуги стр. 17

Глава 2. Държавна социална помощ, предоставена под формата на предоставяне на граждани на набор от социални услуги стр. 18

Стерилизация - (от лат. Defertility) - е пълното унищожаване на m / o и техните спори чрез въздействието както на физически фактори, така и на химически препарати. Стерилизацията се извършва след PSO дезинфекция и PSO контрол на качеството. Стерилизацията е най-важното звено, последната бариера пред профилактиката на вътреболничните инфекции в лечебните заведения. Той предпазва пациента от всякакви инфекции.

Документи, регламентиращи методите на стерилизация.

Трябва да се помни, че за извършване на стерилизация е необходимо да се познават и могат да се прилагат закони, инструкции, правила и други инструктивни и методически документи в областта на инфекциозната безопасност. В момента е в сила индустриалният стандарт (ост. 42-21-8-85, който определя методите, средствата и режимите на стерилизация и дезинфекция на медицински изделия, който е допълнен със заповед № 408 „Методически указания за дезинфекция, PSO и стерилизация, медицински консумативи", одобрен от Министерството на здравеопазването на Русия на 30 декември 1998 г. № MU-287-113. Тези документи са задължителни и определящи за всички здравни заведения и предоставят широк избор от най-подходящи средства и методи за условията на това заведение.с кръв или инжекционни препарати и някои видове медицински инструменти, които влизат в контакт с лигавиците по време на работа, могат да причинят тяхното увреждане.

Методите за стерилизация разграничават:

- физически(термични): пара, въздух, гласперлени;

- химически: газ, химикали, радиация;

- плазма и озон(група химикали).

Изборът на един или друг метод на стерилизация зависи от свойствата на обекта и самия метод - неговите предимства и недостатъци. Опакованите продукти се стерилизират в децентрализирани или централизирани системи, както и в промишлени предприятия, които произвеждат медицински изделия за еднократна употреба. Продукти без опаковка се стерилизират само с децентрализирана система за здравеопазване. Методите за стерилизация с пара и въздух са най-разпространени в здравните заведения.

Стерилизатори: пара, въздух, газ.

Метод на пара:

Надежден нетоксичен, евтин, гарантира стерилността не само на повърхността, но и на целия продукт. Извършва се при сравнително ниска температура, има щадящо въздействие върху обработвания материал, позволявайки стерилизация на продуктите в опаковката, като по този начин предотвратява риска от повторно замърсяване на м/о.

Стерилизиращият агент при този метод е наситена водна пара под налягане.

Режими на стерилизация:

1-ви режим (основен) - t 132 0, 2 атм., 20` - предназначен за продукти от калико, марля, стъкло, включително спринцовки с надпис "200 0 C", продукти от устойчив на корозия метал.

2-ри режим (щадящ) - t 120 0, 1.1 atm., 45` - препоръчва се за изделия от тънък каучук, латекс, полиетилен с висока плътност.

3 режим - t 134 0 , 2 атм., 5`.

Условия за стерилизация: всички продукти се стерилизират на пара под налягане, предварително поставени опаковки - кутии за стерилизация (биксове или контейнери). С или без филтри, крафт торби и други опаковки, предназначени за парна стерилизация.

Срокът на годност на стерилизираните продукти зависи от опаковката:

Продукти, стерилизирани в стерилизационни кутии без филтър (CS) - 3 дни (72 часа);

В стерилизационни боксове с филтър (CF) - до 20 дни, при ежемесечна смяна на филтрите;

В двойна мека опаковка от памучен плат, крафт хартия - 3 дни. (72 часа).

Недостатъци на метода:

Причинява корозия на инструменти, изработени от нестабилни метали;

Превръщайки се в кондензат, той овлажнява стерилизираните продукти, като по този начин подобрява условията на съхранение и увеличава риска от повторно замърсяване на m / o.

въздушен метод.

Стерилизиращият агент е сух горещ въздух. Отличителна черта на метода е липсата на овлажняване на опаковките и продуктите и свързаното с това намаляване на периода на стерилност, както и корозия на металите.

Режими на стерилизация:

1 режим (основен) - t 180 0 - 60 мин. - предназначени за стерилизация на стъклени продукти, включително спринцовки с надпис "200 0 C", метални изделия, включително устойчиви на корозия метали.

2-ри режим (щадящ) - t 160 0 - 150 мин. - е предназначен за стерилизация на продукти от силиконова гума, както и части от някои устройства и устройства.

Условия за стерилизация: продуктите се стерилизират без опаковка върху мрежи, опаковани в опаковъчна хартия, която отговаря на изискванията на действащия индустриален стандарт.

Недостатъци на метода:бавно и неравномерно нагряване на стерилизирани продукти; необходимостта от използване на по-високи температури; невъзможност за използване за стерилизация на продукти от каучук, полимери; невъзможност за използване на всички налични опаковъчни материали.

Бележки:сухите продукти се подлагат на стерилизация; продукти, стерилизирани в крафт плик, опаковка без торбичка от мокроустойчива хартия, съхранение - 3 дни. (72 часа); в 2-слойна опаковка от креп хартия за мед. цели - до 20 дни; продуктите, стерилизирани без опаковка, трябва да се използват веднага след стерилизация по време на работната смяна (6 часа) при асептични условия.

Метод на Гласперлен.Изцяло металните зъболекарски и козметични инструменти се стерилизират чрез потапяне на стъклени перли, загряти до 190-250 0 в средата.

Времето за обработка е посочено в инструкцията за употреба на конкретния стерилизатор.