Fizikalne metode sterilizacije.
MINISTRSTVO ZA ZDRAVJE RUJSKE FEDERACIJE
SPLOŠNO FARMAKOPEJSKO DOVOLJENJE
SterilizacijaOFS.1.1.0016.15
Namesto čl. GFXI, številka 2
Ta monografija splošne farmakopeje določa metode in pogoje sterilizacije, ki se uporabljajo pri pripravi sterilnih zdravil.
Sterilnost se razume kot odsotnost živih mikroorganizmov in njihovih spor.
Sterilizacija je validiran postopek, ki se uporablja pri pripravi sterilnih dozirnih oblik za osvoboditev izdelka, opreme, pomožnih snovi in embalaže iz živih mikroorganizmov in njihovih spor.
Pri spreminjanju pogojev sterilizacije, vključno s spreminjanjem volumna obremenitve sterilizatorja, je treba ponovno potrditi.
Spodaj opisane metode so uporabne za inaktivacijo bakterij, kvasovk in plesni.
Izdelke po možnosti steriliziramo v končni embalaži (končna sterilizacija).
V primerih, ko dokončna sterilizacija ni mogoča, se uporablja metoda membranske filtracije ali izdelava zdravil v aseptičnih pogojih brez naknadne sterilizacije končnega izdelka. Dodatno je možno izvesti obdelavo predmeta (npr. sterilizacija z gama sevanjem) v končni embalaži. V vseh primerih morata embalaža in zapirala zagotavljati sterilnost zdravila med celotnim rokom uporabnosti.
STOPNJA ZAGOTAVLJENOSTI STERILNOSTI
Za spodaj opisane metode je po potrebi navedena stopnja zagotavljanja sterilnosti (SAL).
Stopnja zagotovila sterilizacije postopka sterilizacije je stopnja zagotovila, s katero proces zagotavlja sterilnost vseh predmetov v seriji. Za dani proces je stopnja zagotavljanja sterilnosti opredeljena kot verjetnost, da je v seriji nesterilni izdelek. Na primer, SRL = 10 -6 pomeni, da obstaja verjetnost, da bo v sterilizirani seriji 10 6 končnega izdelka obstajal največ en sposoben preživet mikroorganizem. Stopnja zagotavljanja sterilnosti postopka sterilizacije za posamezen izdelek se določi med postopkom validacije.
METODE IN POGOJI STERILIZACIJE
Sterilizacijo lahko izvedemo z eno od naslednjih metod ali njihovo kombinacijo.
- Toplotne metode:
- nasičena para pod tlakom (avtoklaviranje);
- vroč zrak (sterilizacija zraka).
- Kemične metode:
- plini;
- antiseptične raztopine.
- Sterilizacija s filtracijo (skozi filtre z zahtevano velikostjo por).
- Metoda sevalne sterilizacije.
Uporaba modifikacije ali kombinacije teh metod je dovoljena pod pogojem, da je izbrani postopek sterilizacije validiran, da se zagotovi tako učinkovitost postopka kot celovitost izdelka, embalaže in zapiral.
Za vse metode sterilizacije, vključno z uporabo standardnih pogojev, za potrditev, da so izpolnjeni potrebni pogoji sterilizacije za celotno serijo izdelka, se spremljanje izvaja skozi ves proces sterilizacije v kritičnih fazah proizvodnje.
Termična sterilizacija
Sterilizacija z nasičeno paro pod tlakom (avtoklaviranje)
Sterilizacija z nasičeno paro se izvaja pri temperaturi
120 - 122 °C pri tlaku 120 kPa in pri temperaturi 130 - 132 °C pri tlaku 200 kPa. Ta metoda se najpogosteje uporablja za vodne raztopine in druge tekoče dozirne oblike v hermetično zaprtih, predsteriliziranih vialah, ampulah ali drugih vrstah embalaže. Sterilizacija se izvaja v parnih sterilizatorjih (avtoklavih). Standardni pogoji so segrevanje pri temperaturi 120 - 122 ° C 8-15 minut. Čas sterilizacije je odvisen od fizikalno-kemijskih lastnosti in prostornine izdelka ter od uporabljene opreme (tabela 1).
Tabela 1 – Časi sterilizacije za različne količine raztopine
Maščobe in olja steriliziramo pri temperaturi 120 - 122 °C 2 uri.
Izdelke iz stekla, porcelana, kovine, obloge in pomožne materiale, če je potrebno, sanitarna tehnološka oblačila, steriliziramo pri temperaturi 120 - 122 ° C - 45 minut, pri
130 - 132 ° C - 20 minut. Za sterilizacijo gumijastih izdelkov uporabite prvi od teh načinov.
Druge kombinacije časa in temperature so dovoljene, če je bilo predhodno dokazano, da izbrani režim sterilizacije zagotavlja potrebno in ponovljivo raven uničenja mikrobov. Uporabljeni postopki morajo zagotavljati stopnjo zagotavljanja sterilnosti največ 10-6.
Avtoklav je napolnjen tako, da se zagotovi enakomernost temperature skozi celotno obremenitev. Med postopkom avtoklaviranja je treba zabeležiti pogoje postopka sterilizacije (temperatura, tlak in čas). Temperaturo običajno merimo s termoelementi, nameščenimi v kontrolne pakete, skupaj z dodatnimi termoelementi, nameščenimi na najhladnejših mestih sterilizacijske komore, ki so nameščeni vnaprej. Pogoji vsakega sterilizacijskega cikla so zabeleženi na primer v obliki temperaturno-časovne karte ali na drug primeren način.
Za oceno učinkovitosti vsakega sterilizacijskega cikla je mogoče uporabiti tako kemične (termo-časovne) kot biološke kazalnike.
Sterilizacija z vročim zrakom (sterilizacija zraka)
Za to metodo termične sterilizacije so standardni pogoji segrevanje pri temperaturi najmanj 160 °C najmanj
2 uri
Za sterilizacijo toplotno odpornih praškastih snovi (natrijev klorid, cinkov oksid, smukec, bela glina itd.) ali mineralnih in rastlinskih olj, maščob, lanolina, vazelina, voska ipd., se temperatura in čas sterilizacije nastavita glede na na maso vzorca (tabela 2 in 3).
Tabela 2 – Pogoji sterilizacije za toplotno odporne praške
Tabela 3 - Pogoji sterilizacije mineralnih in rastlinskih olj, maščob, lanolina, vazelina, voska itd.
Izdelke iz stekla, kovine, porcelana, sterilizacijske filtrirne enote s filtri in filtratne sprejemnike steriliziramo pri temperaturi 180 °C 60 minut oziroma pri temperaturi 160 °C 2,5 ure.
Zračna sterilizacija nad 220°C se običajno uporablja za sterilizacijo in depirogenacijo steklene embalaže. V tem primeru je treba namesto z uporabo bioloških indikatorjev dokazati zmanjšanje količine toplotno odpornih endotoksinov za 3 velikosti.
Kombinacije časa in temperature se lahko uporabijo, če je bilo predhodno dokazano, da izbrani režim sterilizacije zagotavlja potrebno in ponovljivo raven uničenja mikrobov. Uporabljeni postopki morajo zagotavljati stopnjo zagotavljanja sterilnosti največ 10-6.
Zračna sterilizacija se izvaja v posebni suhogrejni omari s prisilnim kroženjem sterilnega zraka ali na drugi opremi, posebej zasnovani za ta namen. Sterilizacijsko omaro je naloženo tako, da zagotavlja enakomernost temperature skozi celotno obremenitev. Temperaturo v sterilizacijski omari običajno merimo s termoelementi, nameščenimi v kontrolne pakete, skupaj z dodatnimi termoelementi, nameščenimi na najhladnejših mestih sterilizacijske omare, ki so vnaprej nameščeni. Temperatura in čas se zabeležita med vsakim sterilizacijskim ciklom. Za oceno učinkovitosti vsakega sterilizacijskega cikla je mogoče uporabiti tako kemične (termo-časovne) kot biološke kazalnike.
Kemična sterilizacija
Kemična sterilizacija se izvaja s plinom ali raztopinami.
Plinska sterilizacija
Plinska sterilizacija se uporablja le, če drugih metod ni mogoče uporabiti. S to metodo sterilizacije je treba zagotoviti prodiranje plina in vlage v steriliziran izdelek ter naknadno razplinjevanje in odstranitev njegovih razgradnih produktov v steriliziranem izdelku do ravni, ki ne povzroča toksičnega učinka pri uporabi zdravila. .
Sterilizacija s plinom se izvaja v plinskih sterilizatorjih ali mikroanaerostatih (prenosnih aparatih), opremljenih s sistemom za oskrbo s plinom in razplinjevanjem po sterilizaciji. Kot plin se običajno uporablja etilen oksid. Zaradi visoke požarne nevarnosti se lahko meša s katerim koli inertnim plinom.
Sterilizacija s plinom se izvaja na naslednji način:
- - etilen oksid: sterilizacijski odmerek 1200 mg / dm 3, temperatura ne nižja od
18 °C, relativna vlažnost 80%, čas zadrževanja - 16 ur (prenosna naprava); - - mešanica etilen oksida in metilbromida (1:2,5):
a) sterilizacijski odmerek 2000 mg / dm 3, temperatura 55 ° C, relativna vlažnost 80 %, čas izpostavljenosti 4 ure;
b) sterilizacijski odmerek 2000 mg/dm 3 , temperatura najmanj 18 °C, relativna vlažnost 80 %, čas izpostavljenosti 16 ur.
Dovoljena je uporaba drugih potrjenih načinov sterilizacije plina, ki zagotavljajo sterilnost in varnost predmeta.
Etilen oksid je lahko mutagen in strupen, zlasti pri uporabi materialov, ki vsebujejo kloridne ione. Zaradi strupenosti etilen oksida in metilbromida je uporaba izdelkov, steriliziranih s temi plini, dovoljena šele po njihovem razplinjevanju, to je izpostavljenosti v prezračevanem prostoru dovoljenim količinam ostankov, določenih v regulativni dokumentaciji.
Pogoji razplinjevanja so odvisni od namena, načina uporabe, dimenzij izdelka, materiala izdelka in embalaže ter so navedeni v regulativni in tehnični dokumentaciji za izdelek.
Če je mogoče, se med postopkom sterilizacije zabeležijo naslednji indikatorji: koncentracija plina, relativna vlažnost, temperatura in čas sterilizacije. Meritve se izvajajo na tistih območjih, kjer so pogoji sterilizacije najslabše doseženi, kar se ugotovi v postopku validacije.
Sterilizirani izdelki so pakirani v vrečke iz polietilenske folije debeline 0,06 do 0,20 mm, pergamenta itd. Metoda je priporočljiva za izdelke iz gume, polimernih materialov, stekla, kovine.
Učinkovitost postopka plinske sterilizacije se preverja pri vsaki obremenitvi z uporabo bioloških indikatorjev.
Pred sprostitvijo vsake serije se na določenem številu vzorcev preveri sterilnost.
Kemična sterilizacija z raztopinami
Kemična sterilizacija se izvaja z antiseptičnimi raztopinami (vodikov peroksid in perkislina). Učinkovitost sterilizacije z antiseptičnimi raztopinami je odvisna od koncentracije učinkovine, časa sterilizacije in temperature sterilizacijske raztopine.
Pri sterilizaciji s 6% raztopino vodikovega peroksida mora biti temperatura sterilizacijske raztopine najmanj 18 ° C, čas sterilizacije je 6 ur; pri temperaturi 50 ° C - 3 ure.
Pri sterilizaciji z 1% raztopino deoksona-1 (s perocetno kislino) mora biti temperatura sterilizacijske raztopine najmanj 18 ° C, čas sterilizacije je 45 minut.
Kemična sterilizacija z antiseptičnimi raztopinami se izvaja v zaprtih posodah iz stekla, plastike ali posode, prekrite z nepoškodovanim emajlom, pri čemer je izdelek ves čas sterilizacije popolnoma potopljen v raztopino. Nato izdelek speremo s sterilno vodo v aseptičnih pogojih.
Metoda sterilizacije z antiseptičnimi raztopinami se uporablja za izdelke iz polimernih materialov, gume, stekla, kovin, odpornih proti koroziji.
Sterilizacija s filtracijo
Nekatere učinkovine in zdravila, ki jih ni mogoče končno sterilizirati z nobeno od zgoraj opisanih metod, lahko steriliziramo z membranskimi filtri. Takšni izdelki zahtevajo posebne previdnostne ukrepe. Proizvodni proces in delovno okolje morata zagotoviti, da je tveganje mikrobne kontaminacije čim manjše in ga je treba redno spremljati. Oprema, embalaža, zapirala in, kjer je mogoče, sestavine morajo biti ustrezno sterilizirani. Priporočljivo je, da filtracijo opravite neposredno pred polnjenjem embalaže. Postopki po filtraciji se izvajajo v aseptičnih pogojih.
Predfiltracija se izvaja skozi membranske filtre z velikostjo por ne več kot 0,45 μm. Nato raztopine prehajajo skozi membranske filtre z nazivno velikostjo por ne več kot 0,22 mikrona, ki lahko zadržijo najmanj 10 7 mikroorganizmov. Pseudomonas diminuta na kvadratni centimeter površine. Uporabite lahko druge vrste filtrov, ki zagotavljajo enako učinkovitost filtracije.
Primernost membranskih filtrov ugotavljamo z mikrobiološkim testiranjem z uporabo ustreznih mikroorganizmov, npr. Pseudomonas diminuta(ATCC 19146, NCIMB 11091 ali CIP 103020). Priporočljivo je uporabiti najmanj 10 7 CFU/cm 2 aktivne filtrirne površine. Suspenzijo mikroorganizmov pripravimo v triptonsko-sojini juhi, ki jo po prehodu skozi filter aseptično zberemo in inkubiramo v aerobnih pogojih pri temperaturi, ki ne presega 32 °C.
Stopnja filtracije je opredeljena kot vrednost logaritma zmanjšanja (LDR) mikrobne kontaminacije. Na primer, če se med filtracijo skozi membranski filter z velikostjo por 0,22 µm zadrži 107 mikroorganizmov, je VLS najmanj 7.
Upoštevati je treba stopnjo mikrobne kontaminacije pred filtracijo, pretok filtra, velikost serije izdelka, trajanje filtracije in preprečiti kontaminacijo izdelka z mikroorganizmi iz filtra. Obdobje uporabe filtra ne sme presegati časa, določenega med validacijo tega filtra v kombinaciji s posebnim filtriranim izdelkom. Membranskih filtrov ne uporabljajte ponovno.
Celovitost membranskega filtra, ki je pripravljen za uporabo, se preveri pred in po filtraciji s preskusi, ki ustrezajo vrsti filtra in stopnji preverjanja, na primer preskus nasičenosti ("mehurčka") z metodo difuzijskega toka ali zadrževalnim tlakom. .
Zaradi večje potencialne nevarnosti filtracijske sterilizacije v primerjavi z drugimi metodami sterilizacije je priporočljivo predfiltriranje skozi membranske filtre v primerih, ko ni mogoče zagotoviti nizke stopnje mikrobne kontaminacije z drugimi sredstvi.
Prejem zdravil v aseptičnih pogojihbrez naknadne sterilizacije končnega izdelka
Cilj pridobivanja zdravil v aseptičnih pogojih brez naknadne sterilizacije končnega izdelka je ohranjanje sterilnosti zdravila z uporabo komponent, od katerih je bila vsaka predhodno sterilizirana z eno od zgoraj opisanih metod. To dosežemo z izvajanjem postopka v prostorih določenega razreda čistoče, pa tudi z uporabo pogojev in opreme, ki zagotavljajo sterilnost.
V aseptičnih pogojih se lahko izvaja: postopek polnjenja embalaže, zapiranje, aseptično mešanje sestavin, čemur sledi aseptično polnjenje in zapiranje. Za ohranjanje sterilnosti sestavin in končnega izdelka med proizvodnim procesom je treba posebno pozornost nameniti:
- – stanje proizvodnega okolja;
- – osebje;
- – kritične površine;
- – sterilizacija embalaže in zapiral ter postopki prenosa;
- - najdaljši dovoljeni čas skladiščenja izdelka do polnjenja končne embalaže.
Validacija postopka vključuje pravilno preverjanje vsega zgoraj naštetega, pa tudi sistematične kontrole z uporabo simulacijskih testov z uporabo gojišč, ki se inkubirajo in pregledajo glede mikrobne kontaminacije (preskusi polnjenja medijev). Pred sprostitvijo vsake serije filtrirno steriliziranega in/ali aseptično proizvedenega izdelka je treba opraviti testiranje sterilnosti na ustreznem številu vzorcev.
Metoda sevalne sterilizacije
Metoda sevalne sterilizacije se izvaja z obsevanjem izdelka z ionizirajočim sevanjem. Ta metoda se lahko uporablja za sterilizacijo zeliščnih surovin, zeliščnih zdravil, zeliščnih zdravil itd.
γ-sevanje, katerega vir je lahko radioizotopni element (na primer kobalt-60) ali elektronski žarek, ki ga dovaja ustrezen elektronski pospeševalnik.
Za to metodo sterilizacije je absorpcijski odmerek nastavljen od
10 do 50 kGy. Lahko se uporabijo tudi drugi odmerki, če je bilo predhodno dokazano, da izbrani režim zagotavlja potrebno in ponovljivo stopnjo smrtnosti mikroorganizmov. Uporabljeni postopki in previdnostni ukrepi morajo zagotavljati stopnjo zagotavljanja sterilnosti največ 10-6.
Prednost sevalne sterilizacije je njena nizka reaktivnost in enostavno nadzorovana doza sevanja, ki jo je mogoče natančno izmeriti. Sevalna sterilizacija poteka pri minimalni temperaturi, vendar lahko obstajajo omejitve pri uporabi nekaterih vrst steklene in plastične embalaže.
Med postopkom sevalne sterilizacije je treba sevanje, ki ga absorbira končni izdelek, nenehno spremljati z uveljavljenimi dozimetričnimi metodami, ne glede na odmerek. Dozimetri se kalibrirajo glede na standardni vir v referenčnem objektu za sevanje po prejemu od dobavitelja in nato v intervalih, ki ne presegajo enega leta.
Če je zagotovljena biološka ocena, se izvede z uporabo bioloških indikatorjev.
BIOLOŠKI INDIKATORJI STERILIZACIJE
Biološki kazalci so standardizirani pripravki določenih mikroorganizmov, ki se uporabljajo za oceno učinkovitosti postopka sterilizacije.
Biološki indikator so običajno bakterijske spore, ki se nanesejo na inerten nosilec, kot je trak filtrirnega papirja, steklena plošča ali plastična cev. Inokulirani nosilec izoliramo tako, da preprečimo njegovo poškodbo ali kontaminacijo in hkrati zagotovimo stik sterilizacijskega sredstva z mikroorganizmi. Suspenzije spor so lahko v hermetično zaprtih ampulah.
Biološki kazalniki so pripravljeni tako, da zagotavljajo njihovo varnost pod določenimi pogoji; morajo imeti rok uporabnosti.
Isti sevi bakterij, ki se uporabljajo pri proizvodnji bioloških indikatorjev, se lahko inokulirajo neposredno v tekoči izdelek, ki ga je treba sterilizirati, ali v tekoči izdelek, podoben tistemu, ki se sterilizira. V tem primeru je treba dokazati, da tekoči produkt nima zaviralnih učinkov na spore, zlasti na njihovo kalitev.
Za biološki indikator so navedene naslednje značilnosti: vrsta bakterij, ki se uporabljajo kot referenčni mikroorganizmi; številka seva v izvirni zbirki; število živih spor na nosilca; vrednost D.
vrednost D– vrednost parametra sterilizacije (trajanje ali absorbirana doza), ki zmanjša število živih mikroorganizmov na 10 % njihovega začetnega števila. Ta vrednost je smiselna za dobro opredeljene eksperimentalne pogoje sterilizacije. Biološki indikator mora vsebovati samo določene mikroorganizme. Dovoljena je uporaba bioloških indikatorjev, ki vsebujejo več kot eno vrsto bakterij na enem nosilcu. Navesti je treba podatke o gojišču in pogojih inkubacije.
Priporočljivo je, da se indikatorji postavijo na območja, ki so najmanj dostopna sterilizacijskemu sredstvu, določena predhodno empirično ali na podlagi predhodnih fizikalnih meritev. Po izpostavitvi sterilizacijskemu sredstvu se nosilec spor prenese v hranilni medij v aseptičnih pogojih.
Dovoljena je uporaba bioloških indikatorjev industrijske proizvodnje v zaprtih ampulah s hranilnim medijem, nameščenih neposredno v embalaži, ki ščiti inokulirani nosilec.
Izbira referenčnih mikroorganizmov za biološke kazalnike se izvede ob upoštevanju naslednjih zahtev:
- - odpornost testnega seva na določeno metodo sterilizacije mora biti višja od odpornosti vseh patogenih mikroorganizmov in drugih mikroorganizmov, ki kontaminirajo proizvod;
- - testni sev mora biti nepatogen;
- – testni sev mora biti enostaven za gojenje.
Če po inkubaciji opazimo rast referenčnih mikroorganizmov, to kaže na nezadovoljiv postopek sterilizacije.
Značilnosti uporabe bioloških indikatorjev sterilizacije
Sterilizacija z nasičeno paro pod pritiskom
Biološki indikatorji za spremljanje sterilizacije z nasičeno paro pod tlakom se priporočajo za uporabo pri validaciji sterilizacijskih ciklov. Priporočljivo je uporabljati bacil stearothermophilus(na primer ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157 ali CIP 52.81). Število živih spor mora presegati 5 x 10 5 na nosilca. vrednost D pri temperaturi 121 ° C naj bo več kot 1,5 minute. Ko biološki indikator obdelujemo s paro pri temperaturi (121 ± 1) °C pod tlakom 120 kPa 6 minut, je treba paziti na ohranitev živih spor in obdelavo pri isti temperaturi 15 min. popolna smrt referenčnih mikroorganizmov.
Zračna sterilizacija
Priporočljivo za pripravo bioloških indikatorjev bacil subtilis(npr. var. Niger ATCC 9372, NCIMB 8058 ali CIP 77.18). Število živih spor mora presegati 1 ∙ 10 5 na nosilca, vrednost D pri temperaturi 160 °C je 1 - 3 min. Vroči zrak pri temperaturah nad 220°C se pogosto uporablja za sterilizacijo in depirogenizacijo steklene opreme. V tem primeru lahko zmanjšanje količine toplotno odpornih bakterijskih endotoksinov za 3 rede velikosti služi kot nadomestek za biološke kazalnike.
Sevalna sterilizacija
Za spremljanje tekočih operacij je mogoče uporabiti biološke kazalnike kot dodatno oceno učinkovitosti dane doze sevanja, zlasti v primeru sterilizacije s pospešenimi elektroni. Priporočljivi so spori bacil pumilus(na primer ATCC 27.142, NCTC 10327, NCIMB 10692 ali CIP 77.25). Število živih spor mora presegati 1 ∙ 10 7 na nosilca. vrednost D mora biti več kot 1,9 kGy. Preveriti je treba, da po obsevanju biološkega indikatorja z dozo 25 kGy (minimalna absorbirana doza) ne opazimo rasti referenčnih mikroorganizmov.
Plinska sterilizacija
Uporaba bioloških indikatorjev je bistvena za vse postopke plinske sterilizacije, tako za validacijo cikla kot za rutinske operacije. Priporočljivo je, da uporabite spore bacil subtilis(npr. var. Niger ATCC 9372, NCIMB 8058 ali CIP 77.18) pri uporabi etilen oksida. Število živih spor mora presegati 5 x 10 5 na nosilca. Parametri stabilnosti so naslednji: D je več kot 2,5 min za preskus cikla pri 600 mg/l etilen oksida, 54 °C in 60 % relativni vlažnosti. Preveriti je treba, da po 60-minutnem sterilizacijskem ciklu z določenimi parametri ne opazimo rasti referenčnih mikroorganizmov, medtem ko po 15-minutnem sterilizacijskem ciklu pri nižji temperaturi (600 mg/l, 30 °C, 60 % vlažnost) ), se ohrani sposobnost preživetja spor.
Biološki indikator mora biti sposoben zaznati premajhno vlago v sterilizatorju in izdelku: ko je izpostavljen etilen oksidu v koncentraciji 600 mg/l pri temperaturi 54 °C 60 minut brez vlage, je treba ohraniti sposobnost preživetja spor. .
MINISTRSTVO ZA ŠOLSTVO IN ZNANOST
BALTSKA FEDERALNA UNIVERZA
IMENOV PO IMMANUELU KANTU
BIOEKOLOŠKA FAKULTETA
METODE STERILIZACIJE
Študentje 2. letnika
redno izobraževanje
Pankina A. N.,
Voloshina A. Yu.
Kaliningrad
Uvod……………………………………………………………………………………………..3
Metode sterilizacije……………………………………………………………………….……4
1 Metode fizične sterilizacije…………………………………………………….….5
1.1 Vžig…………………………………………………………………………..5
1.2 Sterilizacija s suho toploto…………………………………………………………..5
1.3 Vlažna toplotna sterilizacija………………………………………………………..5
1.4 Vrenje…………………………………………………………………………..5
1.5 Sterilizacija s paro……………………………………………………..6
1.6 Avtoklaviranje…………………………………………………………...6
1.7 Frakcijska sterilizacija………………………………………………………………..7
1.8 Pasterizacija………………………………………………………………...7
1.9 Tindalizacija…………………………………………………………………………..7
2 Kemične metode sterilizacije………………………………………………………..8
2.1 Tekočina …………………………………………………………………….8
2.2 Plinska metoda…………………………………………………………………….….8
2.3 Plazma………………………………………………………………….………….9
3 Sterilizacija z ionizirajočim sevanjem………………………………………9
3.1 Metoda sevanja…………………………………………………………………..10
3.2 Ultravijolično sevanje……………………………………………...10
Uvod
Sterilizacija je popolna sprostitev katerega koli predmeta iz vseh vrst mikroorganizmov, vključno z bakterijami in njihovimi sporami, glivami, virioni, pa tudi iz prionskih beljakovin, ki jih najdemo na površinah, opremi, hrani in zdravilih. Izvaja se s toplotnimi, kemičnimi, sevalnimi, filtracijskimi metodami.
Koraki sterilizacije:
dezinfekcija;
čiščenje pred sterilizacijo (PSO);
sterilizacija.
Metode sterilizacije
1 Fizikalne metode sterilizacije
Fizikalne metode sterilizacije vključujejo vpliv visoke temperature na sterilizirane predmete (termalna sterilizacija), pa tudi izpostavljenost ultravijoličnemu sevanju, visokofrekvenčnim tokovom, ultrazvočnim vibracijam, radioaktivnemu sevanju, infrardečim žarkom itd.
V lekarniški praksi se za sterilizacijo posode in zdravil uporabljajo le metode, ki temeljijo na izpostavljenosti visokim temperaturam. Ultravijolično obsevanje se uporablja predvsem za razkuževanje zraka v lekarniških prostorih, posodah in receptih, ki vstopajo v lekarno.
Uporaba visoke temperature za sterilizacijo temelji na ireverzibilni koagulaciji protoplazme, njenem pirogenskem uničenju in poškodbi encimskih sistemov mikrobne celice. Temperatura in trajanje ogrevanja, potrebno za dosego sterilnosti, se lahko razlikujeta glede na vrsto mikroflore in druge pogoje.
Večina patogenov umre pri približno 60°C, vendar lahko njihove spore prenesejo veliko višje temperature. Tekoča para in vrela voda ubijata mikroorganizme veliko hitreje, vendar številne spore v teh pogojih preživijo več ur (zlasti v viskoznih medijih). Čista vodna para je močnejša kot v mešanici z zrakom.
Para pod tlakom (pri temperaturah nad 100°C) hitreje uniči mikroorganizme. Suh vroč zrak ubija bakterije in njihove spore pri višji temperaturi kot para. Izbira metode je odvisna od lastnosti predmeta, ki ga je treba sterilizirati. Pri izbiri metode sterilizacije stremijo k popolni odstranitvi žive mikroflore in spor, hkrati pa ohranijo zdravilno snov nespremenjeno.
Kalcinacija
Vžig je ena najbolj zanesljivih vrst sterilizacije. Izvaja se v muflnih ali lončenih pečeh s segrevanjem predmeta na 500-800 ° ali z žganjem na golem ognju. Uporablja se za sterilizacijo platinastih igel za brizgo, porcelanskih filtrov in drugih predmetov iz porcelana. Jeklenih predmetov ni priporočljivo sterilizirati na ta način, saj rjavijo in izgubijo utrjevanje.
Sterilizacija s suho toploto
Predmet, ki ga steriliziramo, segrevamo v pečici pri temperaturi 180°C 20-40 minut ali pri 200°C 10-20 minut. S suho toploto steriliziramo steklene in porcelanaste posode, maščobe, vazelin, glicerin, toplotno odporne praške (kaolin, streptocid, smukec, kalcijev sulfat, cinkov oksid itd.).
V sušilnih omarah je nemogoče sterilizirati vodne raztopine v bučkah, saj se voda pri visokih temperaturah spremeni v paro in bučko se lahko strga.
Sterilizacija z vlažno toploto
Pri uporabi te metode sterilizacije se združijo učinki visoke temperature in vlage. Če suha toplota povzroča predvsem pirogensko uničenje mikroorganizmov, potem vlažna toplota povzroči koagulacijo beljakovin, kar zahteva sodelovanje vode.
V praksi se sterilizacija z vlažno toploto izvaja pri temperaturi 50-150 ° in se izvaja na naslednje načine.
Vreti
S to metodo se sterilizirajo gumijasti predmeti, kirurški instrumenti, steklena posoda. Za sterilizacijo injekcijskih raztopin ni priporočljivo uporabljati vrenja, saj je po učinkovitosti bistveno slabše od sterilizacije s paro.
Parna sterilizacija
Tekočina se imenuje nasičena vodna para (brez primesi zraka), ki ima tlak 760 mm Hg. Umetnost. in temperaturo 100°. Sterilizacija s tekočo paro poteka v parnem sterilizatorju ali avtoklavu pri 100°C 15-60 minut, odvisno od prostornine raztopine. To je ena izmed pogostih metod sterilizacije raztopin za injiciranje v lekarnah.
Avtoklaviranje
Parna sterilizacija pod pritiskom (avtoklaviranje). Izvaja se v avtoklavih različnih izvedb. Avtoklav je hermetično zaprta posoda, sestavljena iz debelostenske sterilizacijske komore in ohišja. Avtoklav ima varnostni ventil, ki omogoča uhajanje pare pri nadtlaku, in manometer. Vsak avtoklav mora imeti navodila za njegovo delovanje in vzdrževanje ter potni list za nadzor kotla.
Predmet, ki ga je treba sterilizirati, se postavi v parno komoro. Vodna komora je izpostavljena segrevanju. Najprej se avtoklav segreje z odprto pipo, dokler para ne teče v močnem neprekinjenem toku in izpodrine zrak v avtoklavu, kar bistveno zmanjša toplotno prevodnost vodne pare (z vsebnostjo 5 % zraka v vodni pari se zmanjša za 50 %).
Med segrevanjem avtoklava po zaprtju ventila je potrebno spremljati tlak, vzporedno s povečanjem katerega se temperatura pare poveča.
Avtoklaviranje je najbolj zanesljiva metoda sterilizacije. Običajno se sterilizacija v avtoklavu izvaja pri 119-121°C 5-30 minut, odvisno od volumna raztopine. To zagotavlja dovolj popolno sterilizacijo, ne glede na vrsto mikroorganizma. Tako se sterilizirajo posode, papirnati in stekleni filtri, instrumenti, vodne raztopine visokotemperaturno odpornih zdravil in prelivi.
Frakcijska sterilizacija
Pri frakcijski sterilizaciji predmet (običajno vodno raztopino) segrevamo s tekočo paro pri 100°C 30 minut, nato raztopino hranimo pri sobni temperaturi 24 ur, nato pa ponovno steriliziramo pod enakimi pogoji (30 minut). pri 100°C). Opisani cikel se ponovi 3-5 krat. Pri prvem segrevanju odmrejo vegetativne oblike mikroorganizmov, pri naslednjem segrevanju pa novo nastale vegetativne oblike. Zaradi trajanja se ta metoda v lekarnah redko uporablja.
Pasterizacija
Enkratno segrevanje predmeta pri temperaturi 60° 1 uro ali pri temperaturi 70-80° 30 minut. Omogoča uničenje vegetativnih oblik mikrobov (razen termofilnih), ne pa tudi spor.
Tindalizacija
Tindalizacija (frakcijska pasterizacija). Med tindalizacijo predmet segrevamo pri temperaturi 60-65° 1 uro dnevno 5 dni ali pri 70-80° 3 dni. To je zanesljiv in nežen način za sterilizacijo termolabilnih zdravilnih snovi. Vendar zaradi svojega trajanja ni zelo primeren za lekarne in se v slednjih skoraj nikoli ne uporablja.
Kemične metode sterilizacije
tekoča metoda
S pomočjo tekoče sterilizacije se obdelujejo izdelki iz toplotno občutljivih materialov. Obdelava se izvaja s posebnimi kemičnimi raztopinami s kamerami.
So posoda iz nerjavnega jekla s pokrovom in perforirano polico. Orodja se obdelujejo pod delovanjem posebne raztopine, ki se po potrebi lahko segreje.
Takšne komore se lahko uporabljajo tudi za shranjevanje in transport orodja.
plinska metoda
Plinska sterilizacija se izvaja z etilenoksidnimi in formaldehidnimi metodami. Za to se uporabljajo posebne stacionarne instalacije.
Metoda etilen oksida je zelo primerna za obdelavo plastičnih in polimernih izdelkov, optike. Izvaja se s posebno plinsko komoro. Iz komore se evakuira zrak, predmeti, ki so v njej, pa se obdelajo s plinom.
Za dezinfekcijo je primernejša formaldehidna metoda, saj ima formaldehid nizke penetracijske lastnosti. Poleg tega naj bi temperatura v obdelovalni komori dosegla 80°C.
Glavna prednost metod plinske sterilizacije je nizkotemperaturni način postopka, ki omogoča obdelavo instrumentov, ki ne dopuščajo izpostavljenosti visoki temperaturi in vlagi.
Plinski sterilizatorji so opremljeni s sistemom za izkoriščanje plina, zaradi česar so neškodljivi tako za ljudi kot za okolje. Oprema je opremljena z vgrajenimi prezračevalniki. Sredstvo za sterilizacijo je v zamenljivih zaprtih kartušah, ki se odprejo šele, ko je naprava popolnoma zaprta.
plazma
Metoda plazemske sterilizacije je najsodobnejša in praktična metoda, ki vam omogoča obdelavo vseh medicinskih izdelkov in pripomočkov, ki so občutljivi na vlago in temperaturo. Ta metoda temelji na ustvarjanju biocidnega okolja z uporabo nizkotemperaturne plazme in vodne raztopine vodikovega peroksida.
Pri uporabi plazemske metode se uničijo vse vrste mikroorganizmov v kakršni koli obliki, ne nastajajo strupeni odpadki.
Predelava v plazemskem sterilizatorju je suh postopek, poteka pri temperaturah do 60°C in traja od 35 minut.
Ta metoda najde najširšo uporabo pri obdelavi optičnih sistemov, izdelkov iz polimernih materialov, električnih instrumentov in kablov, endoskopov in sorodnih instrumentov, senzorjev, vsadkov in drugih izdelkov.
Plazemska metoda je danes ena najbolj relevantnih in zanesljivih metod.
Sterilizacija z ionizirajočim sevanjem
sevalna metoda
Sevalna metoda oziroma sevalna sterilizacija z γ-žarki se uporablja v posebnih napravah za industrijsko sterilizacijo za enkratno uporabo - polimerne brizge, sistemi za transfuzijo krvi, petrijevke, pipete in drugi lomljivi in termolabilni izdelki.
Ultravijolično sevanje
Ultravijolično (UV) sevanje (valovna dolžina 253,7 nm) se že vrsto let uporablja v farmacevtski tehnologiji za sterilizacijo. Viri UV sevanja - živosrebrne kvarčne sijalke. Njihovo močno bakteriostatsko delovanje temelji na sovpadanju emisijskega spektra sijalke in absorpcijskega spektra DNK mikroorganizmov, kar je lahko vzrok njihove smrti pri dolgotrajni izpostavljenosti sevanju kvarčne sijalke. Pri nezadostno močnem UV delovanju v prokariontski celici se aktivirajo procesi popravljanja svetlobe in teme in celica si lahko opomore. Metoda se uporablja za sterilizacijo dovodnega in izpušnega prezračevanja, opreme v biksih, pa tudi za sterilizacijo destilirane vode.
Vrenje je metoda sterilizacije, ki zagotavlja sterilizacijo pod pogojem, da v steriliziranem materialu ni spor. Uporabljajo se za obdelavo brizg inštrumentov, steklenih in kovinskih pripomočkov, gumijastih cevi itd.
Sterilizacija z vrenjem se običajno izvaja v sterilizatorju - pravokotni kovinski škatli s tesno prilegajočim se pokrovom. Material za sterilizacijo položimo na mrežico v sterilizatorju in napolnimo z vodo. Za povečanje vrelišča in odpravo trdote vode dodajte 1-2% natrijevega bikarbonata (bolje je uporabiti destilirano vodo). Sterilizator se zapre s pokrovom in segreje.Začetek sterilizacije se šteje za trenutek vrele vode, čas vrenja je 15-30 minut. Mrežo z orodjem ob koncu sterilizacije odstranijo stranski ročaji s posebnimi kavlji, orodja v njej pa vzamemo s sterilno pinceto ali kleščami, ki jih skupaj s preostalim orodjem prekuhamo.
Sterilizacija s paro poteka na dva načina: 1) s paro pod pritiskom; 2) tekoča para.
Parna tlačna sterilizacija proizvedeno v avtoklavu. Ta metoda sterilizacije temelji na učinku nasičene vodne pare na sterilizirane materiale pri tlaku nad atmosferskim. Zaradi takšne sterilizacije tako vegetativne kot sporne oblike mikroorganizmov odmrejo med enim samim zdravljenjem.
Avtoklav (slika 12) - masivni kotel, na zunanji strani prekrit s kovinskim ohišjem, hermetično zaprt s pokrovom, ki je tesno privit na kotel s tečajnimi vijaki. Drugi, manjši premer, ki se imenuje sterilizacijska komora, se vstavi v zunanji kotel. Predmeti, ki jih je treba sterilizirati, so nameščeni v to komoro. Med obema kotloma je prost prostor, imenovan vodno-parna komora. Voda se v to komoro vlije skozi lijak, pritrjen na zunanji strani do določene ravni, označene na posebni cevi za merjenje vode. Ko se voda zavre v parni komori, nastane para. Komora za sterilizacijo je opremljena z izstopno pipo z varnostnim ventilom za izhod pare, ko tlak naraste nad zahtevano raven. Manometer se uporablja za določanje tlaka, ki nastane v sterilizacijski komori.
riž. 12. Shema avtoklava. M - manometer; PC - varnostni ventil; B - lij za vodo; K 2 - pipa za izpust vode; K 3 - pipa za izpust pare
Normalni atmosferski tlak (760 mm Hg) se vzame za nič. Obstaja določena povezava med odčitki manometra in temperaturo (tabela 2).
Tabela 2. Način delovanja avtoklava
Zdaj so na voljo avtoklavi s samodejnim nadzorom načina. Poleg običajnega manometra so opremljeni z elektrokontaktnim manometrom, ki preprečuje dvig tlaka nad nastavljeno vrednostjo in s tem zagotavlja konstantnost želene temperature v avtoklavu.
S paro pod tlakom se sterilizirajo različna hranila (razen tistih, ki vsebujejo naravne beljakovine), tekočine (izotonična raztopina natrijevega klorida, voda itd.); naprave, zlasti tiste z gumijastimi deli.
Temperaturo in trajanje avtoklaviranja hranilnih medijev določa njihova sestava, navedena v receptu za pripravo hranilnega medija. Na primer, preproste medije (mesno-peptonski agar, mesno-peptonsko juho) steriliziramo 20 minut pri 120 ° C (1 atm). Vendar je pri tej temperaturi nemogoče sterilizirati gojišča, ki vsebujejo naravne beljakovine, ogljikove hidrate in druge snovi, ki jih je mogoče enostavno spremeniti s segrevanjem. Medij z ogljikovimi hidrati steriliziramo frakcijsko pri 100°C ali v avtoklavu pri 112°C (0,5 atm) 10-15 minut. Različne tekočine, naprave z gumijastimi cevmi, čepi, bakterijske sveče in filtri steriliziramo 20 minut pri 120 °C (1 atm).
Pozor! V avtoklavih se okuženi material tudi nevtralizira. Skodelice in epruvete, ki vsebujejo kulture mikroorganizmov, damo v posebna kovinska vedra ali rezervoarje z luknjami v pokrovu za prodiranje pare in steriliziramo v avtoklavu pri 126 °C (1,5 atm) 1 uro. Inštrumente po delu steriliziramo na enak način. z bakterijami, ki povzročajo polemike.
Z avtoklavom smejo delati le posebej usposobljene osebe, ki morajo strogo in natančno upoštevati pravila, navedena v navodilih, priloženih napravi.
Tehnika avtoklaviranja. 1. Pred delom preverite uporabnost vseh delov in prekrivanje pip.
2. Skozi lij, pritrjen na zunanji strani kotla, se voda (destilirana ali prekuhana) vlije do zgornje oznake vodomernega stekla, da se ne tvori vodni kamen. Pipa pod lijakom je zaprta.
3. Material, ki ga je treba sterilizirati, je nameščen na posebno mrežico v sterilizacijski komori. Predmetov ne nalagajte pretesno, saj mora med njimi prosto prehajati para, sicer se ne segrejejo na pravo temperaturo in lahko ostanejo nesterilni.
4. Gumijasto tesnilo na pokrovu natremo s kredo za boljše tesnjenje.
5. Pokrov se zapre in privije na telo avtoklava, vijaki pa so zasukani v parih navzkrižno.
6. Popolnoma odprite izpušni ventil, ki povezuje sterilizacijsko komoro z zunanjim zrakom, in začnite segrevati avtoklav. Avtoklav se običajno ogreva s plinom ali elektriko.
Ko se avtoklav segreje, voda zavre, nastala para se dvigne med stene kotlov in skozi posebne luknje v steni notranjega kotla (glej sliko 12), vstopi v sterilizacijsko komoro in izstopi skozi odprt izstopni ventil. Najprej para uhaja skupaj z zrakom, ki je bil v avtoklavu. Bistveno je, da se ves zrak iztisne iz avtoklava, sicer odčitek manometra ne bo ustrezal temperaturi v avtoklavu.
Pojav neprekinjenega močnega curka pare kaže na popolno odstranitev zraka iz avtoklava; po tem se izstopna pipa zapre in tlak v avtoklavu začne postopoma naraščati.
7. Za začetek sterilizacije se šteje trenutek, ko odčitki manometra dosežejo določeno vrednost. Ogrevanje je regulirano tako, da se tlak v avtoklavu določen čas ne spreminja.
8. Po preteku časa sterilizacije se segrevanje avtoklava ustavi, para se sprosti skozi izstopno pipo. Ko igla manometra pade na nič, odprite pokrov. Da preprečite opekline zaradi pare, ki ostane v avtoklavu, odprite pokrov proti sebi.
Lahko se preveri nivo temperature v avtoklavu, to je pravilnost manometra. Za to se uporabljajo različne snovi, ki imajo določeno tališče: antipirin (113 ° C), resorcinol in žveplo (119 ° C), benzojska kislina (120 ° C). Eno od teh snovi zmešamo z zanemarljivo količino barvila (magenta ali metilensko modro) in vlijemo v stekleno cev, ki jo zapremo in postavimo v navpični položaj med materialom, ki ga želimo sterilizirati. Če je temperatura zadostna, se snov stopi in spremeni v barvo ustreznega barvila.
Za preverjanje učinkovitosti sterilizacije v avtoklav damo epruveto z znano kulturo spor. Po avtoklaviranju se epruveta prenese v termostat za 24-48 ur, opazimo odsotnost ali prisotnost rasti. Odsotnost rasti kaže na pravilno delovanje naprave.
Parna sterilizacija proizvedeno v aparatu Koch. Ta metoda se uporablja v primerih, ko se predmet, ki ga je treba sterilizirati, spremeni pri temperaturi nad 100 ° C. Tekoča para sterilizira hranilne medije, ki vsebujejo sečnino, ogljikove hidrate, mleko, krompir, želatino itd.
Koch aparat (kotel) je kovinski cilinder, obložen na zunanji strani (za zmanjšanje prenosa toplote) s klobučevino ali azbestom. Jeklenka je zaprta s stožčastim pokrovom z luknjo za uhajanje pare. V notranjosti jeklenke je stojalo, do katerega se vlije voda. Na stojalo se postavi vedro z luknjo, v katero se položi material za sterilizacijo. Koch aparat se ogreva s plinom ali elektriko. Čas sterilizacije se šteje od trenutka močnega sproščanja pare na robovih pokrova in od izstopa pare. Sterilizirajte 30-60 minut. Po koncu sterilizacije se ogrevanje ustavi. Vedro z materialom odstranimo iz aparata in pustimo na sobni temperaturi do naslednjega dne. Ogrevanje se izvaja 3 dni zapored pri temperaturi 100 ° C 30-60 minut. Ta metoda se imenuje frakcijska sterilizacija. Pri prvem segrevanju vegetativne oblike mikrobov odmrejo, sporne pa ostanejo. Čez dan imajo spore čas, da vzklijejo in se spremenijo v vegetativne oblike, ki odmrejo drugi dan sterilizacije. Ker je možno, da nekatere spore niso imele časa kaliti, se material hrani še 24 ur, nato pa se izvede tretja sterilizacija. Sterilizacija s tekočo paro v aparatu Koch ne zahteva posebnega nadzora, saj je sterilnost pripravljenih hranilnih medijev pokazatelj pravilnega delovanja naprave. Sterilizacijo s paro lahko opravite tudi v avtoklavu z odvitim pokrovom in odprtim izstopnim ventilom.
testna vprašanja
1. Katera gojišča lahko steriliziramo s paro?
2. Kaj je sterilizator in kako deluje?
3. Zakaj je treba za sterilizacijo z vreliščem uporabiti destilirano vodo?
4. Opišite napravo in način delovanja avtoklava.
5. Kaj se sterilizira v avtoklavu?
6. Kaj nadzoruje pravilno sterilizacijo v avtoklavu?
7. Kaj je parna sterilizacija?
8. Opišite napravo Kochovega aparata.
9. Kaj je namen frakcijske sterilizacije?
Vaja
Izpolnite obrazec.
Frakcijsko sterilizacijo lahko izvedemo tudi v Koch navijalki.
Koch Coiler se uporablja za koagulacijo hranilnih medijev sirotke in jajc, hkrati z zbijanjem medija pa se sterilizira.
Koch navijalnik je ravna kovinska škatla z dvojnimi stenami, na zunanji strani prekrita s toplotnoizolacijskim materialom. Voda se vlije v prostor med stenami skozi posebno luknjo, ki se nahaja v zgornjem delu zunanje stene. Luknja je zaprta z zamaškom, v katerega je vstavljen termometer. Napravo zaprite z dvema pokrovoma: steklenim in kovinskim. Skozi stekleni pokrov lahko opazujete proces strjevanja. Epruvete z mediji so nameščene na dno navijalke v nagnjenem položaju.
Ogrevanje navitja se izvaja s plinom ali elektriko. Medij steriliziramo enkrat pri temperaturi 90 °C 1 uro ali delno - 3 dni zapored pri 80 °C 1 uro.
Tindalizacija* - frakcijska sterilizacija pri nizkih temperaturah - uporablja se za snovi, ki se zlahka uničijo in denaturirajo pri temperaturi 60 ° C (na primer beljakovinske tekočine). Material, ki ga je treba sterilizirati, segrevamo v vodni kopeli ali v posebnih napravah s termostati pri temperaturi 56-58 ° C eno uro 5 dni zapored.
* (Metoda sterilizacije je poimenovana po Tyndallu, ki jo je predlagal.)
Pasterizacija- sterilizacija pri 65-70 ° C 1 uro, ki jo je predlagal Pasteur za uničenje nespornih oblik mikrobov. Pasterizirajte mleko, vino, pivo, sadne sokove in druge izdelke. Mleko pasteriziramo, da se znebimo mlečne kisline in patogenih bakterij (Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Shigella, Salmonella, Staphylococcus itd.). Pasterizacija piva, sadnih sokov, vina ubija mikroorganizme, ki povzročajo različne vrste fermentacije. Pasterizirana živila je najbolje hraniti v hladilniku.
testna vprašanja
1. Kakšen je namen in naprava Kochove navijalke?
2. Kakšni so načini sterilizacije v navijalki?
3. Kaj je tindalizacija?
4. Kaj je pasterizacija?
VREDNOTENJE UČINKOVITOSTI DELOVANJA ANTISEPTIKOV IN RAZKUŽILNIH SREDSTEV. DOLOČANJE OBČUTLJIVOSTI BAKTERIJ NA PROTIMIKROBNA ZDRAVILA
Uvod. Uničenje patogenih mikrobov za človeka je eden najpomembnejših problemov pri preprečevanju in zdravljenju različnih bolezni. Za boj proti mikrobom se uporabljajo metode asepse, antiseptikov, dezinfekcije in protimikrobne terapije. Vsaka metoda ima svoje posebne cilje in pogoje uporabe.
Tema 7.1. METODE ZA OCENJEVANJE PROTIMIKROBNEGA UČINKA KEMIJSKIH IN FIZIKALNIH DEJAVNIKOV
Uvod.Asepsa - sistem ukrepov, ki preprečujejo vnos (vdor) mikroorganizmov iz okolja v tkiva ali votline človeškega telesa med terapevtskimi in diagnostičnimi manipulacijami, pa tudi v material za raziskave, v hranilne medije in kulture mikroorganizmov v laboratorijskih študijah . Asepsis zagotavlja skladnost s posebnimi sanitarno-higienskimi pravili in metodami dela ter posebno obdelavo orodij, materialov, rok zdravstvenih delavcev, prostorov itd. z namenom delnega (dezinfekcija) ali popolnega (sterilizacija) uničenja mikrobov.
Antiseptiki- kompleks terapevtskih in preventivnih ukrepov za uničenje mikroorganizmov, ki lahko povzročijo infekcijski proces na poškodovanih predelih kože in sluznic, z njihovo obdelavo z mikrobicidnimi snovmi - antiseptiki.
Sterilizacija- popolno uničenje mikroorganizmov, vključno z vegetativnimi oblikami in sporami. Obstajajo 3 glavne skupine metod sterilizacije: fizikalne, mehanske in kemične. Izbira metode za reševanje praktičnega problema je odvisna od predmeta, ki ga je treba sterilizirati.
Dezinfekcija- dezinfekcija okoljskih predmetov. Za razliko od sterilizacije dezinfekcija povzroči smrt večine, vendar ne vseh oblik mikrobov in tako zagotavlja le zmanjšanje mikrobne kontaminacije (kontaminacije), ne pa popolne dekontaminacije predmeta. Zato predmeti, ki so bili razkuženi, niso popolnoma varni.
▲ Načrtujte
▲ Program
1. Aseptično, antiseptično in dezinfekcijsko. Antiseptiki in razkužila.
2. Protimikrobno delovanje fizikalnih in kemičnih dejavnikov.
3. Metode sterilizacije; aparat, ki se uporablja za sterilizacijo.
4. Metode spremljanja učinkovitosti sterilizacije, delovanja antiseptikov in razkužil.
Demonstracija
1. Aparati, ki se uporabljajo pri sterilizaciji: avtoklav, pečica, aparat za filtracijo in UV obsevanje.
AMPAK Vajaštudenti
1. Upoštevajte rezultate poskusov, opravljenih z bakterijskimi testnimi objekti, za nadzor učinkovitosti sterilizacije, ki se izvaja s vrenjem in avtoklaviranjem. Za sklepanje.
2. Določite antibakterijski učinek UV-žarkov na stafilokoke in Escherichia coli z uporabo že pripravljenih posevkov.
3. Upoštevajte rezultate poskusov, postavljenih za ugotavljanje protimikrobnega učinka antiseptičnih in razkužilnih snovi. Za sklepanje.
Smernice
Metode sterilizacije
I. Fizikalne metode. Izpostavljenost visokim temperaturam. Visoka temperatura deluje mikrobicidno zaradi sposobnosti denaturacije najpomembnejših biopolimerov, predvsem beljakovin.
Sterilizacija s suho toploto v sušilni in sterilizacijski omari (Pasterove peči) temelji na baktericidnem učinku zraka, segretega na 165-170 ° C 45 minut. Pri višji temperaturi pride do zoglenitve čepkov, papirja, v katerega je zavita posoda, pri nižji pa je potrebna daljša sterilizacija. S suho toploto steriliziramo stekleno posodo (Petrijevke, epruvete, pipete itd.).
Avtoklaviranje- Sterilizacija s pregreto paro (pri povišanem tlaku) v parnem sterilizatorju (avtoklavu). Ena najučinkovitejših metod sterilizacije, ki se pogosto uporablja ne le v mikrobiološki, ampak tudi v klinični praksi. Delo z avtoklavom zahteva natančno izvajanje posebnih navodil in skladnost z varnostnimi pravili. Najvišjo temperaturo pare merimo s posebnim termometrom, ki ga damo v avtoklav skupaj z materialom za sterilizacijo. V nekaterih primerih se uporabljajo kemikalije s specifičnim tališčem: benzonaftol (PO °C), benzojska kislina (120 °C). Številna hranila, obloge, perilo steriliziramo pri tlaku 1 atm 15-20 minut, hranilne medije z ogljikovimi hidrati pri 0,5 atm 15 minut, dezinfekcijo okuženega materiala pa izvajamo pri 1,5-2 atm 20-25 minut. (Tabela 7.1.1).
Tabela 7.1.1. Razmerje med tlakom, temperaturo in trajanjem sterilizacije v parnem sterilizatorju (avtoklavu)
0 100 30-60 (delno) 0,5 111 20-30
1 121 15-20 1,5 127 15-20
Parna sterilizacija izvedeno v avtoklavu z odvitim pokrovom in odprto izhodno pipo. Ta metoda sterilizacije temelji na antibakterijskem učinku pare na vegetativne celice. Uporablja se v primerih, ko material, ki ga je treba sterilizirati, ne prenese visokih temperatur, kot so hranilni mediji z vitamini, ogljikovi hidrati. Za popolno dekontaminacijo se uporablja princip frakcijske sterilizacije, tj. material steriliziramo pri 100 "C (ali 80-90 °C) 20-30 minut 3 dni zapored. V tem primeru vegetativne celice odmrejo, spore pa ostanejo in vzklijejo v 1 dnevu. Naknadno dvojno segrevanje zagotavlja dovolj zanesljivo sterilnost materiala.
Tindalizacija - to je frakcijska sterilizacija materialov pri 56-58 "C 1 uro 5-6 dni zapored. Uporablja se za sterilizacijo snovi, ki se pri visokih temperaturah zlahka uničijo (krvni serum, vitamini itd.).
Vžig v plamenužgana peč ali plinski gorilnik
Sprememba je omejena, na primer pri sterilizaciji bakterioloških zank, igel za seciranje, pincete.
Izpostavljenost ionizirajočemu sevanju. Mikrobicidni učinek ionizirajočega sevanja temelji na njihovi sposobnosti, da povzročijo poškodbe v molekuli DNK. Za sterilizacijo medicinskih instrumentov za enkratno uporabo in bakteriološke opreme, občutljive na toplotne učinke (plastične posode za gojenje mikrobov in celičnih kultur, plastične brizge, sistemi za transfuzijo krvi itd.), se običajno uporablja sterilizacija z γ-sevanjem.
I. Mehanske metode. Temeljijo na filtraciji skozi posebne membranske filtre z majhno velikostjo por, ki lahko mehansko zadržijo mikroorganizme. Papirni in polimerni filtri se pogosto uporabljajo v laboratorijski praksi. Obstajajo filtri s porami različnih, strogo kalibriranih velikosti, kar vam omogoča, da zagotovite čiščenje materiala ne le pred bakterijami, ampak tudi pred virusi in, če je potrebno, iz nekaterih makromolekul. Filtracija se uporablja za sterilizacijo tekočih materialov, ki ne prenesejo toplote (krvni serum, protimikrobne raztopine, sestavine hranilnih medijev za bakterije in celične kulture), za pridobivanje bakterijskih toksinov in drugih odpadnih produktov bakterij. Filtracija je po potrebi vodilna metoda sterilizacije zraka. Da bi to naredili, zrak prehaja skozi filtre, impregnirane z mikrobicidi. Takšni sterilizacijski sistemi se uporabljajo na primer v namiznih škatlah za delo s povzročitelji posebej nevarnih okužb, pa tudi v operacijskih sobah, porodnišnicah itd.
III. Kemijske metode. Temeljijo na obdelavi predmeta s kemikalijami, ki imajo mikrobicidni učinek in so sposobne ob določenih načinih izpostavljenosti zagotoviti popolno uničenje mikroflore. Kemična sterilizacija se običajno uporablja za obdelavo različnih naprav in instrumentov za večkratno uporabo, ki so občutljivi na visoke temperature (naprave z optičnimi vlakni, medicinski vsadki itd.). Sredstva za sterilizacijo vključujejo etilen oksid, vodikov peroksid, glutaraldehid, peroksiocetno kislino, klorov dioksid.
Ne glede na metodo je v vseh primerih potrebno redno spremljanje učinkovitosti postopka sterilizacije. V ta namen se uporabljajo biološki indikatorji - znani mikroorganizmi, ki so najbolj odporni na to metodo predelave (npr. Bacillus stearothermophilus za nadzor učinkovitosti avtoklaviranja, Bacillus subtilis- za nadzor sterilizacije s suho toploto). Obstajajo tudi fizikalno-kemijski indikatorji - snovi, ki so vidne
moje spremembe (sprememba barve, agregacijskega stanja itd.) samo, če je upoštevan pravilen način obdelave.
Metode dezinfekcije
Za dezinfekcijo se uporabljajo fizikalne in kemične metode.
I. Fizikalne metode. Izpostavljenost visokim temperaturam
ogled.
Vreti. Brizge, majhni kirurški instrumenti, stekelca in pokrovna stekelca ter nekateri drugi predmeti se dajo v sterilizatorje, v katere vlijemo vodo. Za odpravo trdote in povečanje vrelišča v vodo dodamo 1-2% raztopino natrijevega bikarbonata. Vretje se izvaja najmanj 30 minut. Ko se kuhajo, nekateri virusi (na primer virus hepatitisa B) in bakterijske spore ostanejo sposobni preživeti.
Pasterizacija temelji na antibakterijskem učinku temperature na vegetativne celice, ne pa na bakterijske spore. Material segrevamo pri temperaturi 50-65 "C 5-10 minut, čemur sledi hitro hlajenje. Običajno pasteriziramo pijače in živila (vino, pivo, sokovi, mleko itd.).
Izpostavljenost ionizirajočemu sevanju. ultravijolično sevanje(UV) z valovno dolžino 260-300 mikronov ima dokaj izrazit mikrobicidni učinek, vendar so nekatere vrste mikrobov in spor odporne na UV. Zato UV obsevanje ne more zagotoviti popolnega uničenja mikroflore - sterilizacije predmeta. UV obdelava se običajno uporablja za delno dezinfekcijo (dezinfekcijo) velikih predmetov: površin predmetov, prostorov, zraka v zdravstvenih ustanovah, mikrobioloških laboratorijih itd.
Gama sevanje ima izrazit mikrobicidni učinek na večino mikroorganizmov, vključno z vegetativnimi oblikami bakterij in spore večine vrst, gliv, virusov. Uporablja se za sterilizacijo plastičnih posod in medicinskih instrumentov za enkratno uporabo. Upoštevati je treba, da zdravljenje z gama sevanjem ne zagotavlja uničenja povzročiteljev okužb, kot so prioni.
II. Kemijske metode. To je obdelava razkuženega predmeta
tami - mikrobicidne kemikalije. nekaj
nekatere od teh spojin imajo lahko toksične učinke
na človeško telo, zato se uporabljajo izključno
Za obdelavo zunanjih predmetov. Kot razkužilo
običajno uporabite vodikov peroksid, ki vsebuje klor
enota (0,1-10% raztopina belila, 0,5-5% raztopina
kloramin, 0,1-10
% raztopina dvotretjinske bazične soli hipo-
Kalcijev klorat - DTSGK), formaldehid, fenoli (3-5% raztopina fenola, lizola ali karbolne kisline), jodofori. Izbira razkužila in njegova koncentracija sta odvisna od materiala, ki ga želite razkužiti. Dezinfekcija lahko zadostuje za dekontaminacijo le medicinskih instrumentov, ki ne prodrejo v naravne ovire telesa (laringoskopi, cistoskopi, ventilatorji). Nekatere snovi (borova kislina, mertiolat, glicerin) se uporabljajo kot konzervansi za pripravo terapevtskih in diagnostičnih serumov, cepiv in drugih pripravkov.
Antiseptične metode
Kot antiseptiki se uporabljajo le spojine z nizko toksičnostjo za telo, ki imajo protimikrobni učinek. Najpogosteje se uporabljajo 70 % etilni alkohol, 5 % raztopina joda, 0,1 % raztopina KMn0 4, 0,5–1 % alkoholne raztopine metilen modre ali briljantno zelene, 0,75–4,0 % raztopina klorheksidina, 1–3 % raztopina heksaklorofena in nekatere druge. spojine. Protimikrobna sredstva se dodajajo tudi materialom, ki se uporabljajo pri izdelavi oblog, lepilnih ometov, protez, polnil ipd. da bi jim dali baktericidne lastnosti.
Metode za spremljanje učinkovitosti sterilizacije, delovanja antiseptikov in razkužil. Študija antibakterijskega delovanja visokih temperatur. V epruvete s hranilno juho položimo svilene niti, navlažene z mešanico kultur, ki tvorijo spore (3 epruvete) in ne tvorijo spore (3 epruvete). Avtoklavirajte ali zavrite eno epruveto z vsako kulturo; Kontrolnih cevi ne izpostavljajte udarcem. Po obdelavi vse posevke hranite v termostatu 24 ur pri 37 ° C. Označite rezultat poskusa in naredite zaključek.
Nadzor sterilnosti povoj in kirurških instrumentov. Preizkusne vzorce (ali brise s površine velikih instrumentov) posejemo na tri gojišča: sladkorno juho, tioglikolno gojišče in Sabouraudov tekoči medij. Pridelke inkubiramo v termostatu 14 dni. Če pri vseh pridelkih ni rasti, se material šteje za sterilnega.
Študija protibakterijskega delovanja UV žarkov. Suspenzija stafilokoka oz E.coli v izotonični raztopini natrijevega klorida v volumnu 1 ml postavite na razdaljo 10-20 cm od središča svetilke. Obsevane in neobsevane (kontrolne) bakterijske suspenzije inokulirajte v hranilno juho in inkubirajte
pri 37 °C 16-24 ur, nato pa ocenite rezultate: odsotnost motnosti medija je povezana s smrtjo obsevane bakterijske kulture, motnost je zabeležena v kontroli, kar kaže na prisotnost rasti.
Določanje protimikrobnega delovanja antiseptikov in razkužil. 1. Pripravite dve vrsti testnih predmetov: a) svilene niti, namočene v kulturo E.coli; b) svilene niti, navlažene s kulturo, ki tvori spore (z visoko vsebnostjo spor). Niti damo v raztopine fenola (5%), lizola (5%), belila (10%) za 5 in 60 minut, nato speremo iz preskusnih snovi, posejemo v hranilno juho in postavimo v termostat do naslednjega dne. . Kontrolni vzorci ne smejo biti izpostavljeni kemikalijam. Zabeležite rezultat poskusa in naredite zaključek.
2. Plošče filtrirnega papirja navlažite z raztopinami preskusnih snovi in jih položite na površino hranilnega agarja v petrijevko, posejano (s trato) s testno kulturo stafilokoka ali Escherichia coli. Posodo inkubiramo 24 ur pri 37°C. Antibakterijsko delovanje preučevanih snovi ocenjujemo po premeru območij zaviranja rasti bakterij, ki nastanejo okoli diskov.
Tema 7.2. METODE ZA OCENJEVANJE UČINKOVITOSTI DELOVANJA PROTIMIKROBNIH ZDRAVIL
Uvod. Za zdravljenje bolezni, ki jih povzročajo mikroorganizmi, se uporabljajo protimikrobna zdravila (naravni in sintetični antibiotiki). Za učinkovito terapijo je treba izbrati zdravilo, ki ima največjo aktivnost proti temu povzročitelju okužbe in najmanj škoduje normalni človeški mikroflori. Zaradi široke razširjenosti bakterijskih sevov z različnimi stopnjami odpornosti na številna zdravila (multirezistentnost) je kvalitativno (metoda diska) in kvantitativno (metoda serijskega redčenja) ocena občutljivosti bakterij na terapevtska zdravila še posebej pomembna.
▲ Program
1. Spekti delovanja glavnih skupin protimikrobnih zdravil.
2. Vrednotenje učinka protimikrobnih zdravil na bakterije z disk metodo.
3. Določanje minimalne inhibitorne koncentracije (MIC) protimikrobnih zdravil z metodo serijskih razredčitev.
AMPAK. Demonstracija
1. Protimikrobna zdravila različnih skupin.
2. Standardni papirnati diski, impregnirani z protimikrobnimi sredstvi, da se določi občutljivost bakterij nanje.
3. Preglednice in sheme protimikrobnih spektrov najpomembnejših skupin antibiotikov in mehanizmov njihovega protibakterijskega delovanja.
Naloga študentom
1. Postavite poskus za ugotavljanje občutljivosti stafilokokov na različne antibiotike z uporabo disk metode.
2. Na podlagi rezultatov poskusa določimo minimalno inhibitorno koncentracijo penicilina za različne bakterijske kulture z metodo serijskih razredčitev.
Smernice
Kvantitativno določanje občutljivosti bakterij na protimikrobna zdravila z metodo serijskih razredčitev.Ta metoda se uporablja za določitev minimalne inhibitorne koncentracije (MPC) - najnižje koncentracije antibiotika, ki popolnoma zavira rast preučevanih bakterij. Pripravimo osnovno raztopino antibiotika, ki vsebuje zdravilo v določeni koncentraciji (μg / ml ali U / ml) v fiziološki ali pufrski raztopini ali v posebnem topilu. Osnovna raztopina se uporablja za pripravo serijskih (2-kratnih) razredčitev antibiotika v hranilnem mediju - juhi (v volumnu 1 ml) ali agarju. Iz proučevane bakterijske kulture pripravimo suspenzijo standardne gostote in jo inokuliramo v 0,1 ml na gojišče z različnimi koncentracijami antibiotika, pa tudi na medij brez zdravila (kontrola kulture). Kulture inkubiramo pri 37°C 20-24 ur ali več (za počasi rastoče bakterije), nato pa se rezultati poskusa zabeležijo po motnosti hranilne juhe ali pojavu vidne rasti bakterij na agarju, v primerjavi s kontrolo vzeto kot IPC.
za MIC se vzame najvišja koncentracija zdravila, ki preprečuje razvoj CPP ali kopičenje patogenih antigenov v celicah.
Interpretacija rezultatov, t.j. ocena klinične občutljivosti, izvedena na podlagi meril, navedenih v tabeli. 7.2.1. Občutljivi sevi vključujejo bakterijske seve, katerih rast je zavirana pri koncentracijah zdravila, ki jih najdemo v bolnikovem krvnem serumu pri uporabi povprečnih terapevtskih odmerkov antibiotikov. Zmerno odporni sevi vključujejo seve, katerih zaviranje rasti zahteva koncentracije, ki se ustvarijo v krvnem serumu ob dajanju največjih terapevtskih odmerkov zdravila. Odporni so mikroorganizmi, katerih rast zdravilo ne zavira v koncentracijah, ki nastanejo v telesu pri uporabi največjih dovoljenih odmerkov.
Tabela 7.2.1. Interpretacija rezultati določanja občutljivosti bakterij na antibiotike z metodo serijskih razredčitev
| Antibiotik | MIC (mcg/ml) | ||
| čutiti- | vmesno | stabilen- | |
| telo | natančen | chivy | |
| (S) | (D | (R) | |
| Penicilini | |||
| benzilpenicilin: | |||
| za stafilokoke | 0,12 £ | - | >0,25 |
| za druge bakterije | <1,5 | >1,5 | |
| oksacilin | |||
| za zlati stafilokok | <2 | - | >4 |
| za druge vrste stafilokokov | <0,25 | - | >0,5 |
| meticilin | <2 | - | >4 |
| ampicilin: | |||
| za stafilokoke | <0,25 | - | >0,5 |
| za E.coli in druge enterobakterije | <8 | >32 | |
| karbenicilin: | |||
| za E.coli in druge enterobakterije | <16 | >64 | |
| za Pseudomonas aeruginosa | <128 | >512 | |
| Piperacilin | |||
| za E.coli in druge enterobakterije | <16 | >64 | |
| za Pseudomonas aeruginosa | >64 | - | >182 |
| azlocilin | <64 | - | >128 |
| Cefalosporini | |||
| Cefazolin | <8 | >32 | |
| Cefalotin | <8 | >32 | |
| Cefaklor | <8 | >32 | |
| Cefaleksin | <8 | >32 | |
| cefuroksim | <8 | >32 |
Nadaljevanje
vmesno (D
| Cefamandol | <8 | >32 | ||
| Cefotaksim | <8 | 16-32 | >64 | |
| Ceftriakson | <8 | 16-32 | >64 | |
| Cefoperazon | <16 | >64 | ||
| ceftazidim | <8 | >32 | ||
| cefepim | Nova beta | <8 -лактамы | >32 | |
| Imipenem | <4 | >16 | ||
| Meropenem | <4 | >16 | ||
| Kinoloni | ||||
| Nalidiksična kislina | SI6 | - | >32 | |
| Ciprofloksacin | <1 | >4 | ||
| Ofloksacin | <2 | >8 | ||
| Norfloksacin | <4 юзиды | >16 | ||
| Aminogli | ||||
| Kanamicin | <16 | >64 | ||
| gentamicin | <4 | >16 | ||
| Tobramicin | <4 | >16 | ||
| Amikacin | <16 | >64 | ||
| Netilmicin | <8 | >32 | ||
| Tetraciklini, makrolidi, linkozamidi | ||||
| Tetraciklin | <2 | 4-8 | >16 | |
| doksiciklin | <4 | >16 | ||
| Eritromicin | 50,5 | 1-4 | >8 | |
| azitromicin | <2 | >8 | ||
| klaritromicin | <2 | >8 | ||
| Aleandomicin | <2 | >8 | ||
| Linkomicin | <2 | >8 | ||
| klindamicin | <0,25 | 0,5 | >1 | |
| Antibiotiki drugih skupin | ||||
| Kloramfenikol (lev | omicetin) | <8 | >32 | |
| Fusidna kislina | <2 | 4-8 | >16 | |
| Rifampicin | <2 | >8 | ||
| polimiksin | <50 ЕД/мл | >50 U/ml | ||
| Vankomicin | <4 | 8-16 | S32 | |
| Furadonin | <32 | >128 |
Mikrotest sistemi za določanje občutljivosti na protimikrobna zdravila. Mikrotestni sistemi so zasnovani za hitro ugotavljanje klinične občutljivosti na antibiotike bakterij določenih vrst ali sorodnih skupin. Testirana zdravila v standardnih koncentracijah so v vdolbinicah že pripravljenih plastičnih plošč. Določi se občutljivost preučevane kulture na dve koncentraciji vsakega antibiotika: povprečno terapevtsko in največjo. Material iz izolirane kolonije vnesemo v 5 ml standardnega hranilnega medija, ki vsebuje indikator, z merilno bakteriološko zanko (volumen 1 μl) in pripravimo suspenzijo. Pripravljeno bakterijsko suspenzijo vlijemo v vdolbinice tablete po 0,1 ml in inkubiramo v pogojih temperature in plinske sestave medija, ki so optimalni za to vrsto bakterij. Rast bakterij se ocenjuje po spremembi barve indikatorja, kar lahko znatno skrajša čas študije. Če bakterije ostanejo sposobne preživetja v prisotnosti antibiotika, sproščanje presnovnih produktov povzroči spremembo barve indikatorja. Odsotnost spremembe barve kaže na popolno zatiranje vitalne aktivnosti mikroba. Rezultate določimo po 4 urah inkubacije s spektrofotometrom.
Določanje klinične občutljivosti bakterij na protimikrobna zdravila z diskovno metodo (difuzijski test). Metoda temelji na zatiranju rasti bakterij na gostem hranilnem mediju pod delovanjem antibiotika, ki ga vsebuje papirni disk. Zaradi difuzije zdravila v agar se okoli diska oblikuje koncentracijski gradient antibiotika. Velikost območja zaviranja rasti je odvisna od občutljivosti bakterije in lastnosti zdravila (zlasti hitrosti difuzije v agarju). Za določitev občutljivosti v klinični praksi se uporabljajo že pripravljeni standardni diski s strogo določeno vsebnostjo antibiotikov. Vsebnost zdravila se določi na podlagi terapevtskih koncentracij posameznega antibiotika in povprečnih vrednosti MIC za patogene bakterije. Ime zdravila in njegova količina sta navedena na vsaki plošči. Za določitev občutljivosti iz preučevane bakterijske kulture pripravimo suspenzijo, ki vsebuje standardno število živih celic, in jo posejemo s trato v petrijevke (premer 100 mm) na Muller-Hinton ali AGV gojiščih (posebna gojišča, ki ne preprečujejo difuzije protimikrobne snovi in nanje nimajo negativnega učinka). Plošče nanesemo na sejano površino s pomočjo aplikatorja na razdalji 2,5 cm od središča posode v krogu (slika 7.2.1). Na skodelico ni nameščenih več kot 5 diskov. Posevke inkubiramo 18-20 ur pri 35 C. Če je postopek pravilno izveden, na ozadju enotne bakterijske trate okoli diskov,
Območja zaviranja rasti, okrogle oblike. Obračunavanje rezultatov se izvede z merjenjem premera cone zaviranja rasti. Za območje, ki ga želite izmeriti, vzemite območje, kjer je rast bakterij popolnoma odsotna. Interpretacija dobljenih rezultatov (zaključek o občutljivosti) se izvede na podlagi meril, navedenih v tabeli. 7.2.2.
Tabela 7.2.2. Interpretacija rezultatov določanja občutljivosti bakterij na antibiotike z disk metodo (na mediju AGV)
Penicilini
| benzilpenicilin: | ||||
| pri testiranju stafilokokov | 20 £ | 21- | -28 | >29 |
| pri testiranju drugih bakterij | 10 £ | 11- | -16 | 17 £ |
| ampicilin: | ||||
| pri testiranju stafilokokov | <20 | 21- | -28 | 29 £ |
| pri testiranju na gramnegativne | ||||
| bakterije in enterokoki | <9 | 10- | -13 | >14 |
| karbenicilin (25 mcg) | 14 £ | 15- | -18 | >19 |
| Karbenicilin (100 mcg) pri | ||||
| test P. aeruginosa | 11 £ | 12- | -14 | 15 £ |
| meticilin | 13 £ | 14- | -18 | >19 |
| oksacilin (10 mcg) | $15 | 16- | -19 | 20 £ |
| Azlocilin (za P.aeruginosa) | 13 £ | 14- | -16 | 16 £ |
| Piperacilin (za P.aeruginosa) | <17 | >18 | ||
| Aztreonam | <15 | 16- | -21 | 22 £ |
Cefalosporini
Nadaljevanje
| Antibiotik | premer | območja zaostanka v rasti | |
| (mm) | |||
| čutiti- | vmesno | stabilen- | |
| telo | natančen | chivy | |
| (S) | (D | (R) | |
| Novi beta laktami | |||
| imipenem*<13 | 14-15 | >16 | |
| Meropenem*<13 | 14-15 | >16 | |
| Kinoloni | |||
| Ciprofloksacin<15 | 16-20 | >21 | |
| Ofloksacin<12 | 13-16 | >17 | |
| nalidiksična kislina*<12 | 13-17 | >18 | |
| Aminoglikozidi | |||
| Streptomicin<16 | 17-19 | >20 | |
| Kanamicin<14 | 15-18 | >19 | |
| Gentamicin 15 £ | - | >16 | |
| Sizomicin<15 | - | >16 | |
| Tobramicin<14 | - | >15 | |
| Amikacin<14 | 15-16 | >17 | |
| Netilmicin<12 | 13-14 | >15 | |
| Tetraciklini, makrolidi, linkozamidi | |||
| Tetraciklin<16 | 17-20 | >22 | |
| doksiciklin<15 | 16-19 | >20 | |
| Eritromicin<17 | 18-21 | >22 | |
| azitromicin<13 | 14-17 | >18 | |
| roksitromicin*<14 | 15-18 | >19 | |
| Klaritromicin* 13 £ | 14-17 | >18 | |
| Linkomicin<19 | 20-23 | 24 £ | |
| Klindamicin 14 £ | 15-20 | >21 | |
| Oleandomicin 16 £ | 17-20 | >21 | |
| Antibiotiki drugih skupin | |||
| kloramfenikol<15 | 16-18 | >19 | |
| Fusidna kislina<16 | 17-20 | >21 | |
| Rifampicin<12 | 13-15 | >16 | |
| polimiksin<11 | 12-14 | >15 | |
| vankomicin: | |||
| za stafilokoke<11 | - | >12 | |
| za enterokoke<14 | 15-16 | >17 | |
| Ristomicin<9 | 10-11 | >12 | |
| Furadonin 15 £ | 16-18 | >19 | |
| Furagin 15 £ | 16-18 | >19 |
*Preliminarni podatki.
Uporaba metode diska ima številne omejitve. Metoda je primerna le za določanje občutljivosti hitro rastočih bakterij, ki tvorijo homogeno trato v 24 urah na standardnem gostem hranilnem mediju dokaj preproste sestave (Muller-Hinton ali AGW), ki ne vsebuje snovi, ki lahko zmanjšajo aktivnost. antibiotikov ali preprečiti njihovo širjenje. V nasprotnem primeru bodo prejeti podatki netočni.
Tako z diskovno metodo ni mogoče določiti občutljivosti na antibiotike vseh počasi rastočih in najbolj zahtevnih bakterij, ki vključujejo številne človeške patogene. (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp. in mnogi drugi). Pri določanju občutljivosti nekaterih zahtevnih bakterij, za katere so bili razviti standardni testi (Haemophilus spp., Neisseria spp., nekatere vrste streptokokov), pri interpretaciji rezultatov je treba uporabiti posebna gojišča in dodatna merila.
Metoda diska tudi ne daje zanesljivih rezultatov pri določanju občutljivosti bakterij na pripravke, ki slabo difundirajo v agar, na primer polipeptidne antibiotike (polimiksin, ristomicin).
Kvantitativno določanje občutljivosti bakterij na protimikrobna zdravila z E-testom. E-test je različica difuzijske metode, ki vam omogoča določitev MIC antibiotika. Namesto diskov se uporabljajo standardni polimerni trakovi, pripravljeni po posebni tehnologiji (AB BIODISK) in vsebujejo imobilizirana protimikrobna sredstva, ki se nanesejo v obliki neprekinjenega koncentracijskega gradienta. Na drugi strani traku
Tabela 7.2.3. Določanje MIC protimikrobnih zdravil z metodo serijskih razredčitev
E-test ima lestvico vrednosti IPC. Ko se trak položi na površino agarja, nadzorovani difuzijski proces zagotavlja, da se v hranilnem mediju okoli traku ustvari stabilen koncentracijski gradient zdravila, ki ustreza lestvici. Postopek določanja občutljivosti z E-testom poteka podobno kot testiranje z diskovno metodo. Po inkubaciji semena se okoli traku oblikuje eliptična cona zaviranja rasti. Vrednost IPC ustreza presečišču eliptične cone z E-testnim trakom. Za interpretacijo rezultatov (ocena klinične občutljivosti) se uporabljajo standardna merila (tabela 7.2.3).
EKOLOGIJA MIKROORGANIZMOV
Uvod. Ekologija mikroorganizmov je veja splošne mikrobiologije in proučuje razmerje med mikro- in makroorganizmi, ki živijo skupaj v določenih biotopih. V naravnih habitatih (tla, voda, zrak, živi organizmi) so mikrobi del različnih biocenoz. Ekologijo mikrobov, ki povzročajo bolezni pri človeku, določa njihova sposobnost preživetja v zunanjem okolju, spreminjanja gostiteljev, obstoja v telesu gostitelja v ozadju delovanja imunskega sistema in je povezana tudi z načini njihove distribucije, prenos in številni drugi dejavniki. Ocena številnih okoljskih razmer je ena glavnih nalog sanitarne mikrobiologije.
Sanitarne in bakteriološke raziskave so osnova praktičnega dela sanitarnih zdravnikov in epidemiologov pri sanitarno-higienski oceni okoljskih predmetov, živil, pijač itd. in imajo vodilno vlogo pri preprečevanju nalezljivih bolezni. Pomemben predmet študija medicinske mikrobiologije je normalna mikroflora človeškega telesa, ki vključuje mikrobe, ki živijo na koži, sluznicah različnih organov (ustna votlina, žrelo, nazofarinks, zgornja dihala, črevesje, zlasti debelo črevo, itd.). Nekateri od njih so stalno (obvezno) prebivalci človeškega telesa, drugi - začasno (neobvezno ali prehodno). Normalna mikroflora je vitalni telesni sistem, ki zagotavlja zaščito pred številnimi patogenimi mikrobi, zorenje in stimulacijo imunskega sistema, proizvodnjo številnih vitaminov in encimov, ki sodelujejo pri prebavi itd.
Kakovostna in količinska sestava človeške mikroflore se skozi življenje spreminja in je odvisna od spola, starosti, prehrane itd. Poleg tega so lahko nihanja v sestavi človeške mikroflore posledica pojava bolezni in uporabe zdravil, predvsem antibiotikov in imunomodulatorjev. . Vrednotenje kvalitativne in kvantitativne sestave mikroflore človeškega telesa po določenih kazalnikih omogoča prepoznavanje njene kršitve (disbakterioze) in posledic, povezanih z njo.
Tema 8.1. MIKROFLORA VODE, ZRAKA IN TAL. METODE SANITARNO-BAKTERIOLOŠKEGA PREUČEVANJA VODE, ZRAKA IN TAL
g Program
1. Mikroflora vode, zraka in tal.
2. Sanitarni indikativni mikroorganizmi in njihov pomen.
3. Metode za določanje if-indeksa, if-titra in mikrobnega števila vode.
4. Metode za določanje mikrobnega števila zraka.
5. Metode za določanje titra perfringensa, titra coli in števila mikrobov v tleh.
AMPAK Demonstracija
1. Sanitarni in bakteriološki pregled vode z metodo membranskih filtrov.
2. Sanitarni in bakteriološki pregled zraka. Krotov aparat. Rast mikroorganizmov na MPA v petrijevki. Rast hemolitičnih streptokokov na krvnem agarju.
3. Sanitarna in bakteriološka študija tal. Rast Proteus vulgaris(po Šukeviču).
a Naloga študentom
1. Oceniti sanitarno in bakteriološko stanje vode na podlagi rezultatov določanja mikrobnega števila, koli-indeksa in kolititra.
2. Oceniti sanitarno in bakteriološko stanje zraka na podlagi rezultatov določanja mikrobnega števila.
3. Oceniti sanitarno-bakteriološko stanje tal na podlagi rezultatov določanja mikrobnega števila, kolititra, perfringens-titra in titra termofilnih bakterij.
4. Inokulirajte izpiranje s kože rok na glukozno-peptonski medij.
▲ Smernice
Mikrobiološke metode za preučevanje okolja
Za oceno sanitarno-higienskega stanja različnih predmetov okolja, vode, hrane itd., se izvajajo sanitarne in bakteriološke študije, katerih namen je ugotoviti nevarnost epidemije. Vendar pa je neposredno odkrivanje patogenih mikrobov povezano s številnimi težavami, predvsem zaradi nizke koncentracije teh mikrobov, ki se praviloma ne morejo razmnoževati v zraku, vodi in zemlji. Zato se v sanitarni in mikrobiološki praksi uporabljajo posredne metode, ki temeljijo na določanju celotne mikrobne kontaminacije enega ali drugega predmeta in na odkrivanju t.i. sanitarno-indikativne bakterije(Tabela 8.1.1).
Tabela 8.1.1. Sanitarno-indikativne bakterije okolja in hrane
| Predmet | Narava onesnaženja | Indikativne sanitarne bakterije |
| Voda | fekalne | Bakterije iz skupine Escherichia coli Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis |
| Tla | Enako | Iste bakterije in klostridije (Clostridium perfringens, CI. sporogenes in itd.) |
| Industrijski-vsakdanji- | termofilne bakterije, Proteus | |
| vye (razpadajoče smeti) | vulgaris | |
| hrano | fekalne | |
| izdelki | ključavnice S. faecalis, P. vulgaris | |
| Oralna kapljica | zlati stafilokok | |
| Predmeti | fekalne | Bakterije iz skupine črevesnih |
| vsakdanje življenje | ključavnice, P. vulgaris, E. faecalis | |
| Oralna kapljica | S. aureus | |
| Zrak | Enako | S. aureus, S. pyogenes |
| voda, | Industrijski | Proizvodni sevi mikro- |
| tla, | obleke | |
| zrak |
Sanitarno-indikativni mikrobi, ki kažejo fekalna kontaminacija okolje, so bakterije iz skupine Escherichia coli (CGB). Spadajo v različne rodove družine Enterobacteriaceae. Diferencialni diagnostični znaki BGKP so predstavljeni v tabeli. 8.1.2. Odkrivanje E. coli v vseh okoljskih ali živilskih izdelkih velja za najzanesljivejši pokazatelj kontaminacije svežega blata. Prisotnost bakterij Citrobacter in Enterobacter kaže na relativno staro fekalno kontaminacijo. Prisotnost Clostridium perfringens, C. sporogens in drugih klostridij v tleh kaže na njeno fekalno kontaminacijo, tako svežo kot staro, saj te bakterije tvorijo spore, kar jim omogoča, da v okolju (zlasti v tleh) obdržijo dolgo časa. dolgo časa. Odkrivanje v okoljskih objektih Enterococcus faecalis kaže tudi na njihovo fekalno kontaminacijo. Skupina termofilnih bakterij vključuje nepovezane bakterije, predstavnike različnih družin, ki se lahko razmnožujejo pri temperaturi 60 ° C in več. (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus in itd.). Niso stalni prebivalci človeškega črevesja in ne služijo kot merilo za fekalno kontaminacijo okolja. Močno povečanje števila teh bakterij lahko kaže na onesnaženje tal z razpadajočimi odpadki, saj se množijo v samosegrevajočem se gnoju in kompostu.
Tabela 8.1.2. Diferencialni diagnostični znaki BGKP
Escherichia Mešajte + - +
coli kisline
Citrobacter Enako + - p + +
freundii
Enterobacter Butan - - + - + +
aerogenov diol
Simboli: (+) - pozitivna reakcija, (-) - negativna reakcija, p - različne reakcije.
Bakterije, ki pripadajo rodu Proteus (P.vulgaris) itd.) družine Enterobacteriaceae,široko razširjena v naravi. Te gnojne bakterije se v velikem številu nahajajo na razpadajočih ostankih živali in rastlin. Odkrivanje teh bakterij v kateri koli hrani kaže gnilobe.
Hemolitični streptokoki (S.pyogenes), ker so prehodni prebivalci nazofarinksa in žrela, se izločajo s kapljicami sluzi po kapljicah v zraku. Pogoji preživetja hemolitičnih streptokokov v okolju se praktično ne razlikujejo od izrazov, značilnih za večino drugih povzročiteljev okužb v zraku. Odkrivanje hemolitičnih streptokokov v zraku v zaprtih prostorih kaže na njegovo možno kontaminacijo z mikrobi, ki jih vsebujejo žrelo, nazofarinks, zgornji dihalni trakt osebe in so povzročitelji okužb v zraku. zlati stafilokok je neobvezen prebivalec nazofarinksa, žrela, pa tudi človeške kože. Njegova prisotnost v zraku v zaprtih prostorih ali na predmetih, ki se nahajajo, je indikator kontaminacija v zraku. Istočasno odkrivanje Staphylococcus aureus in hemolitičnih streptokokov kaže na visoko stopnjo onesnaženosti zraka.
Sanitarni in bakteriološki pregled vode
Določanje mikrobnega števila vode. Voda iz pipe se inokulira v volumnu 1 ml, voda iz odprtih rezervoarjev - v prostornini 1,0; 0,1 in 0,01 ml. Vse vzorce vnesemo v sterilne petrijevke, nato jih prelijemo z 10-12 ml staljenega in ohladimo na 45-50 °C hranilnega agarja, ki ga previdno prelijemo.
Temeljito pomešano z vodo. Posevke inkubiramo pri 37 °C 1-2 dni. Vodo iz odprtih rezervoarjev inokuliramo vzporedno v dve vrsti skodelic, od katerih se ena inkubira pri 37 °C 1 dan, druga pa 2 dni pri 20 °C. Nato se prešteje in izračuna število kolonij, ki rastejo na površini in v globini medija mikrobno število vode- število mikroorganizmov v 1 ml.
Določanje if-titra in if-indeksa vode. Coli-titer voda - najmanjša količina vode (ml), v kateri so odkriti CGB. Coli-indeks- količina BGKP v 1 litru vode. Ti kazalniki se določijo s titracijsko (fermentacijsko) metodo ali metodo membranskih filtrov.
Metoda titracije. V glukozno peptonski medij inokuliramo različne količine vode (1 % peptonska voda, 0,5 % raztopina glukoze, 0,5 % raztopina natrijevega klorida, indikator Andrede in plovec), za inokulacije velikih količin (100 in 10 ml) pa koncentriran uporablja se medij, ki vsebuje 10-kratno količino teh snovi.
Vodo odprtih površinskih rezervoarjev pregledamo v volumnih 100; deset; 1,0 in 0,1 ml. Za preučevanje vode iz pipe so posevki narejeni v treh volumnih po 100 ml, treh volumnih po 10 ml in treh prostorninah po 1 ml. Inokulacije inkubiramo 1 dan pri 37°C. Fermentacijo ocenjujemo po prisotnosti plinskih mehurčkov v plovcu. Fermentirani ali motni vzorci se gojijo na gojišču Endo. Iz zraslih kolonij naredimo brise, jih obarvamo po Gram metodi in opravimo oksidazni test za razlikovanje bakterij rodov. Escherichia, Citrobacter in Enterobacter iz gram-negativnih bakterij iz družine Pseudomonadaceae in drugih oksidazno pozitivnih bakterij, ki živijo v vodi. V ta namen s površine medija odstranimo 2-3 izolirane kolonije s stekleno paličico, ki jo s potezo nanesemo na filtrirni papir, navlažen z di-metil-p-fenilendiaminom. Pri negativnem oksidaznem testu se barva papirja ne spremeni, pri pozitivnem se v 1 minuti obarva modro. Gram negativne paličice, ki ne tvorijo oksidaze, ponovno pregledamo v fermentacijskem testu - vnesemo jih v poltekoči hranilni agar z 0,5 % raztopino glukoze in inkubiramo pri 37 °C 1 dan. Če je rezultat pozitiven, če je titer in če je indeks določen po statistični tabeli. 8.1.3.
Metoda membranskega filtra. Membranski filter št. 3 se postavi v Seitz lij, nameščen v Bunsenovo bučko, ki je povezana z vakuumsko črpalko. Membranski filtri so predsterilizirani z vrenjem v destilirani vodi. Voda iz vodovodnega omrežja in voda iz arteških vodnjakov se filtrira v prostornini 333 ml. Čisto vodo odprtega rezervoarja filtriramo v volumnu 100, 10, 1,0 in 0,1 ml, bolj kontaminirano vodo pred filtracijo razredčimo s sterilno vodo.
Tabela 8.1.3. Določanje indeksa bakterij iz skupine Escherichia coli pri preučevanju vode
Coli-titer
od 3 volumnov po 100 ml
voda. Nato filtre položimo na površino medija Endo v petrijevke in po 1-dnevni inkubaciji pri 37°C preštejemo število zraslih kolonij, značilnih za CGB. Brise pripravimo iz 2-3 rdečih kolonij, obarvamo po Gramovi metodi in določimo oksidazno aktivnost. Da bi to naredili, se filter s kolonijami bakterij, ki rastejo na njem, s pinceto, ne da bi se obračali, prenese na krog filtrirnega papirja, navlaženega z dimetil-p-fenilendiaminom. V prisotnosti oksidaze indikator obarva kolonijo modro. 2-3 kolonije, ki niso spremenile prvotne barve, inokuliramo v poltekoči medij z 0,5 % raztopino glukoze. Kulture inkubiramo 24 ur pri 37°C. V prisotnosti tvorbe plina se prešteje število rdečih kolonij na filtru in določi indeks coli. Regulativni kazalniki za pitno vodo so navedeni v tabeli. 8.1.4.
Tabela 8.1.4. Standardi za pitno vodo (GOST 2874-82)
| standardno |
Indikator
Število mikrobov v 1 ml vode, ne več kot 100
Število bakterij iz skupine Escherichia coli v 1 litru vode 3
(if-indeks), nič več
Za določitev titra Enterococcus faecalis pripravite 10-kratne razredčitve vode. Celotno vodo in njene razredčine v volumnu 1 ml inokuliramo v enega od tekočih izbirnih gojišč (KF, poli-
Mixinovaya, itd.), inkubiramo pri 37 "C 2 dni, po 24 in 48 urah jih posejemo na gosto elektivno-diferencialno gojišče: KF agar, TTX agar (medij s trifeniltetrazolijevim kloridom), polimiksintelurit agar. Streptokoki so identificirani. na vrsto kolonij, celično morfologijo in obarvanje po Gramovi metodi. Na gojišču s TTX streptokoki tvorijo temno rdeče kolonije, na agarju s teluritom - črne.
Sestava medijev. KF medij: 2% hranilni agar, 1% ekstrakt kvasa, 2% laktoza, 0,4% natrijev azid, 0,06% natrijev karbonat, indikator bromkrezol rdeče.
Polimiksinski medij: 2% hranilni agar, 1% ekstrakt kvasa, 1% glukoza, polimiksin M 200 enot/ml, indikator bromtimol modrega.
Polimiksintelurit agar: 2% hranilni agar, 1% ekstrakt kvasa, 1% glukoza, kristalno vijolična 1:800.000, polimiksin M 200 U/ml, 0,01% kalijev telurit.
Trifeniltetrazolijev klorid agar (TTC): 2% hranilni agar, 1% ekstrakt kvasa, 1% glukoza, kristalno vijolična 1:800.000, 0,01% TTC.
Pri definiranju indeksa E.faecalis uporabite statistične tabele, uporabljene pri določanju koli-indeksa. Poleg tega se v ta namen uporablja metoda membranskega filtra. Za odkrivanje patogenih bakterij voda prehaja skozi membranske filtre, ki jih nato postavimo v tekoče elektivne medije ali na površino gostih diferencialnih diagnostičnih medijev.
Sanitarni in bakteriološki pregled zraka
Določanje mikrobnega števila zraka. Kvantitativne mikrobiološke metode za preučevanje zraka temeljijo na principih sedimentacije (sedimentacije), aspiracije ali filtracije.
metoda sedimentacije. Dve petrijevki s hranilnim agarjem pustimo odprti 60 minut, nato pa posevke inkubiramo v termostatu pri 37 °C. Rezultate ocenimo s skupnim številom kolonij, vzgojenih na obeh posodah: če je manj kot 250 kolonij, zrak se šteje za čist; 250-500 kolonij kaže na srednje stopnjo onesnaženosti, pri čemer je število kolonij več kot 500 - onesnaženo.
metoda aspiracije. To je natančnejša kvantitativna metoda za določanje števila mikrobov v zraku. Zračno sejanje se izvaja s pomočjo naprav. Aparat Krotov (slika 8.1.1) je zasnovan tako, da se zrak z določeno hitrostjo vpije skozi ozko režo plošče iz pleksi stekla, ki zapira petrijevko s hranilnim agarjem.
Slika 8.1.1. Krotov aparat za bakteriološke raziskave
V tem primeru so delci aerosola z mikroorganizmi, ki jih vsebujejo, enakomerno pritrjeni na celotno površino medija zaradi stalnega vrtenja skodelice pod vstopno režo. Po inkubaciji setve v termostatu se mikrobno število izračuna po formuli:
a x 1000 x~y
kjer je a število kolonij, ki rastejo na plošči; V je prostornina zraka, ki prehaja skozi napravo, dm 3; 1000 - standardna prostornina zraka, dm 3.
Pri določanju mikrobnega števila zraka se hranilni agar uporablja za izolacijo hemolitičnih streptokokov - krvni agar z dodatkom gentian violet, čemur sledi kontrolna mikroskopija in selektivna subkultura sumljivih kolonij na krvni agar.
Sestava medijev. Gentian violet krvni agar: 2 % hranilni agar, 5-10 % defibrinirana konjska, zajčja ali ovnova kri, gentian violet (1:50.000).
Rumenjak-solni agar (YSA): 2 % hranilni agar, 10 % natrijev klorid, 20 % (volumensko) rumenjakova suspenzija (1 rumenjak na 200 ml izotonične raztopine natrijevega klorida).
Za študij zraka se lahko uporabljajo tudi druge naprave (Dyakov, Rechmensky, Kiktenko, PAB-1 - vzorčenje -
Nick aerosol bakteriološki, POV-1 - naprava za vzorčenje zraka), s pomočjo katere skozi tekočine ali filtre prehaja določena količina zraka, nato pa se na hranilnih medijih naredijo izmerjeni pridelki. Uporaba PAB-1 in POV-1 omogoča pregledovanje velikih količin zraka in odkrivanje patogenih bakterij in virusov.
Pri pregledu zraka bolnišnic (kirurških, porodniško-ginekoloških itd.) Neposredno izoliramo patogene in oportunistične bakterije - povzročitelje bolnišničnih okužb (stafilokoki, Pseudomonas aeruginosa itd.). V primeru bolnišničnih okužb stafilokokne etiologije se izvajajo študije, katerih cilj je odkrivanje virov in načinov širjenja okužb: s fagotipizacijo se ugotavlja identiteta stafilokokov, izoliranih iz okoljskih predmetov, pa tudi od bolnikov in spremljevalcev. Standardni kazalniki števila in vsebnosti mikrobov Staphylococcus aureus, Quot, 2. poglavje. Državna socialna pomoč v obliki zagotavljanja nabora socialnih storitev državljanom 10 stran
Sterilizacija - (iz lat. Defertility) - je popolno uničenje m/o in njihovih spor pod vplivom tako fizikalnih dejavnikov kot kemičnih pripravkov. Sterilizacija se izvaja po dezinfekciji PSO in kontroli kakovosti PSO. Sterilizacija je najpomembnejši člen, zadnja ovira pri preprečevanju bolnišničnih okužb v zdravstvenih ustanovah. Pacienta ščiti pred kakršno koli okužbo.
Dokumenti, ki urejajo metode sterilizacije.
Ne smemo pozabiti, da je za izvedbo sterilizacije potrebno poznati in znati uporabljati zakone, navodila, pravila in druge poučne in metodološke dokumente s področja varstva pred okužbami. Trenutno je v veljavi industrijski standard (ost. 42-21-8-85, ki opredeljuje metode, sredstva in načine sterilizacije in dezinfekcije medicinskih pripomočkov, ki ga dopolnjuje ukaz št. 408 "Metodološke smernice za dezinfekcijo, PSO in sterilizacija, medicinski material" , ki ga je Ministrstvo za zdravje Rusije odobrilo 30. decembra 1998. št. MU-287-113. Ti dokumenti so obvezni in določujoči za vse zdravstvene ustanove ter zagotavljajo širok izbor najprimernejših sredstev in metod. za razmere v tem objektu.s krvjo ali injekcijskimi pripravki ter nekaterimi vrstami medicinskih instrumentov, ki pridejo med delovanjem v stik s sluznicami, lahko povzročijo njihovo poškodbo.
Metode sterilizacije razlikujejo med:
- fizično(toplotni): para, zrak, glasperleny;
- kemično: plin, kemikalije, sevanje;
- plazma in ozon(skupina kemikalij).
Izbira ene ali druge metode sterilizacije je odvisna od lastnosti predmeta in same metode – njenih prednosti in slabosti. Pakirani izdelki se sterilizirajo v decentraliziranih ali centraliziranih sistemih, pa tudi v industrijskih podjetjih, ki proizvajajo medicinske pripomočke za enkratno uporabo. Izdelke brez embalaže steriliziramo le z decentraliziranim zdravstvenim sistemom. Metode parne in zračne sterilizacije so najpogostejše v zdravstvenih ustanovah.
Sterilizatorji: para, zrak, plin.
Parna metoda:
Zanesljivo, nestrupeno, poceni, zagotavlja sterilnost ne le površine, temveč celotnega izdelka. Izvaja se pri razmeroma nizki temperaturi, nežno vpliva na predelani material, omogoča sterilizacijo izdelkov v embalaži in s tem preprečuje nevarnost ponovne kontaminacije m/o.
Sredstvo za sterilizacijo pri tej metodi je nasičena vodna para pod tlakom.
Načini sterilizacije:
1. način (glavni) - t 132 0, 2 atm., 20` - je namenjen za izdelke iz grobega kaliko, gaze, stekla, vključno z brizgami z oznako "200 0 C", izdelki iz kovine, odporne proti koroziji.
2. način (nežen) - t 120 0, 1,1 atm., 45` - priporočljiv za izdelke iz tanke gume, lateksa, polietilena visoke gostote.
3. način - t 134 0 , 2 atm., 5`.
Pogoji sterilizacije: vsi izdelki sterilizirani s paro pod tlakom, predhodno nameščena embalaža - sterilizacijske škatle (biksi ali posode). S filtri ali brez, kraft vrečkami in drugo embalažo, namenjeno parni sterilizaciji.
Rok uporabnosti steriliziranih izdelkov je odvisen od embalaže:
Izdelki, sterilizirani v sterilizacijskih škatlah brez filtra (CS) - 3 dni (72 ur);
V sterilizacijskih škatlah s filtrom (CF) - do 20 dni, ob mesečni menjavi filtrov;
V dvojni mehki embalaži iz bombažne tkanine, kraft papir - 3 dni. (72 ur).
Slabosti metode:
Povzroča korozijo instrumentov iz nestabilnih kovin;
Pretvori se v kondenzat, vlaži sterilizirane izdelke, s čimer se izboljšajo pogoji skladiščenja in poveča tveganje ponovne kontaminacije m/o.
zračna metoda.
Sredstvo za sterilizacijo je suh vroč zrak. Posebnost metode je, da ne pride do vlaženja embalaže in izdelkov ter s tem povezanega zmanjšanja obdobja sterilnosti, pa tudi korozije kovin.
Načini sterilizacije:
1. način (glavni) - t 180 0 - 60 min. - izdelani za sterilizacijo steklenih izdelkov, vključno z brizgami z oznako "200 0 C", kovinskih izdelkov, vključno s kovinami, odpornimi proti koroziji.
2. način (nežen) - t 160 0 - 150 min. - je namenjena sterilizaciji izdelkov iz silikonske gume ter delov nekaterih naprav in naprav.
Pogoji sterilizacije: izdelki se sterilizirajo brez embalaže na mrežah, pakiranih v embalažni papir, ki ustreza zahtevam veljavnega industrijskega standarda.
Slabosti metode: počasno in neenakomerno segrevanje steriliziranih izdelkov; potreba po uporabi višjih temperatur; nezmožnost uporabe za sterilizacijo izdelkov iz gume, polimerov; neizvedljivost uporabe vseh razpoložljivih embalažnih materialov.
Opombe: suhi izdelki so podvrženi sterilizaciji; izdelki, sterilizirani v kraft vrečki, embalaža brez vrečastega mokrega papirja, skladiščenje - 3 dni. (72 ur); v 2-slojni embalaži iz krep papirja za med. cilji - do 20 dni; sterilizirane izdelke brez embalaže je treba uporabiti takoj po sterilizaciji v delovni izmeni (6 ur) v aseptičnih pogojih.
Glasperlenova metoda. Popolnoma kovinski zobozdravstveni in kozmetični instrumenti se sterilizirajo s potapljanjem steklenih kroglic, segretih na 190-250 0 v medij.
Čas obdelave je naveden v navodilih za uporabo posebnega sterilizatorja.